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刘永亮
作品数:
1
被引量:15
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中国科学院遗传与发育生物学研究所
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相关领域:
生物学
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合作作者
童克忠
中国科学院遗传与发育生物学研究...
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刘永亮
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1994
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利用枯草杆菌碱性蛋白酶E基因的信号顺序构建分泌表达载体
被引量:15
1994年
本文利用枯草杆菌(Bacillussubtilis)碱性蛋白酶基因E(aprE),对建立枯草杆菌分泌表达的载体-宿主系统作了探讨。首先用大肠杆菌(E,coli)-枯草杆菌穿梭的启动子克隆质粒(promoter-probeplasmid)pGKV210对aprE的启动子功能进行检测,发现用E.coli作为研究aprE表达信号的“中间宿主”(intermediatehost)是可行的;然后在穿梭质粒pHP13的基础上,构建了以成熟的β-内酰胺酶基因(M.bla)为报道基因的信号顺序检测质粒,进而构建了基于aprE启动子和信号顺序的分泌表达载体pSP1和pSP2。Bla酶活性测定表明,pSP1上M.bla的表达产物的分泌量比pSP2要高得多。从DNA顺序来看pSP1上信号顺序3端缺失30bp,而pSP2则带有完整的信号顺序。由DNA顺序推知,linker区编码的氨基酸顺序SerGInAlaCys可能是新的信号肽酶识别位点;信号肽长度的变化可能以某种方式影响蛋白质的分泌量。
刘永亮
童克忠
关键词:
分泌
信号肽
Β-内酰胺酶
枯草杆菌
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