连晓雯
- 作品数：29 被引量：59H指数：5
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- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化被引量：2
- 2023年
- 目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬李克生柴丹丹石晓玲连晓雯张学良
- 关键词：真核表达瞬时转染蛋白纯化
- 单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析
- 2012年
- 对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21(DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60 kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白。
- 杜丽娟李克生杜惠芬付宝权连晓雯胡永浩
- 关键词：溶血素原核表达可溶性蛋白
- 大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2011年
- 以热灭活的大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)菌体抗原为免疫原,E.coli O157∶H7菌体结合脂多糖(LPS)为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体。采用改良过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测E.coli O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法。结果,成功制备了9株稳定分泌E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中7F9和7G2为LPS O-特异性多糖(O-SP)单克隆抗体,与E.coli O157∶H7菌体具有较好的反应性。此双抗体夹心ELISA方法对与受试的非O157菌株没有交叉反应,对E.coli O157∶H7纯培养菌液的检出下限为3×104CFU/mL。结果表明,建立的ELISA检测方法对E.coli O157具有较高的特异性和灵敏度,该方法有望与其他方法相结合用于对E.coli O157∶H7的检测。
- 刘红亮李克生陈学忠杜惠芬连晓雯鲁学萍袁明
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2013年
- 为制备抗阪崎肠杆菌(ES)脂多糖(LPS)抗原单克隆抗体(MAb)及建立双抗夹心ELISA检测方法,本研究以热灭活的ES(ATCC51329)菌体抗原作为免疫原,ES菌体结合LPS作为筛选抗原,采用杂交瘤细胞技术筛选获得9株稳定分泌抗ES LPS特异性MAb的杂交瘤细胞株。采用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测ES的双抗体夹心ELISA方法,该方法对ES ATCC51329具有良好的特异性,最低检测限可达103cfu/mL,为食品中ES的检测提供特异性MAb及ELISA检测方法。
- 马卫静李克生杜惠芬彭洪江杜丽娟连晓雯
- 关键词：阪崎肠杆菌脂多糖单克隆抗体
- 抗H5N1亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备和鉴定
- 禽流感/(AIV/)是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染性疾病综合征,有重要的公共卫生意义。本研究的目的是以H5N1亚型高致病性禽流感病毒作为免疫原,研制出抗H5N1亚型禽流感病毒的单克隆抗体/(McAb/),并将其用...
- 连晓雯
- 关键词：H5亚型禽流感病毒单克隆抗体酶联免疫测定法
- 文献传递
- 抗沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)单克隆抗体的制备及初步应用
- 2014年
- 制备抗沙眼衣原体(CT)单克隆抗体,建立沙眼衣原体的胶体金免疫层析快速检测方法。采用纯化沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)免疫Balb/c小鼠,选取高效价的免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,ELISA检测筛选分泌抗MOMP单克隆抗体(McAb)的细胞株并进行相关鉴定。共获得分泌IgG1,IgG2b和IgM的3株单克隆抗体杂交瘤细胞株。纯化的单克隆抗体与鹦鹉热衣原体、肺炎衣原体、肺炎支原体均无交叉反应。通过位点分析选择配对良好的两株McAb,制备检测CT的双抗体夹心法免疫层析试纸条。制备的胶体金试纸条对MOMP的最低检出值可达50 ng·mL-1。
- 连晓雯杜惠芬李克生
- 关键词：单克隆抗体
- β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒
- 本实用新型公开了一种β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖(8)与盒底(14)两部分，卡盒内置比色卡(9)和试纸条。卡盒正面可见检视窗(1)、加...
- 杜惠芬李克生徐杨连晓雯柴丹丹
- 文献传递
- 抗酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)单克隆抗体制备被引量：1
- 2018年
- 【背景】基于本实验室已经建立的脂环酸芽孢杆菌检测和鉴定方法工作基础之上,以期建立具有很好的经济价值和实用价值,且更为方便、快捷、准确、特异、灵敏的检测方法。【目的】实现对果汁生产中脂环酸芽孢杆菌从原料到成品的快速检测和鉴定。【方法】采用杂交瘤细胞技术,以Alicyclobacillus acidoterrestris(ATCC49025)免疫BALB/c小鼠,用建立的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,得到了3株能稳定分泌A.acidocaldarius抗体的杂交瘤细胞株,其中两株为Ig G1亚类,并对其进行生物学特性的鉴定。【结果】得到的两株单抗3F7和9C4是针对不同的抗原位点,且多次传代后稳定性基本保持不变;特异性实验表明两株单抗均不与A.acidocaldarius(NCIMB11725)、Bacillus cereus(ATCC11778)、Bacillus subtilis(ATCC11774)、A.cycloheptanicus(ATCC49029)等发生交叉反应。【结论】3F7和9C4这两株单抗可以进一步用于检测胶体金试纸条的研制。
- 张宇霞连晓雯李儒杜惠芬李克生
- 关键词：脂环酸芽孢杆菌单克隆抗体
- LZTFL1在胃癌等组织中的表达及其与不同黏附因子表达的相关性研究
- 背景:胃癌(Gastric Cancer,GC)是危害人类健康的常见恶性肿瘤,也是全球癌症相关死亡的第二大原因。由于胃癌的浸润转移是一个多基因参与的复杂过程,不仅与癌细胞自身基因结构改变与表达异常有关,还受到组织微环境的...
- 连晓雯
- 关键词：胃癌E-钙粘蛋白Β-连环蛋白细胞间粘附分子-1血管细胞粘附分子-1
- 文献传递
- 甲状腺肿瘤血清β2-MG诊断指标的建立及相关性研究
- 刘勤江李克生王莉王涛杜惠芬连晓雯达静云马世红
- 本项目通过建立血清β2-MG的ELISA快速定量检测方法，研制了β2-MG酶标定量试剂盒。用该方法检测正常人群1002例、甲状腺癌95例、结节性甲状腺肿243例血清β2-MG含量并进行综合分析。正常人群β2-MG浓度平均...
- 关键词：
- 关键词：甲状腺肿瘤血清
