邹永康
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划芜湖市科技计划重点项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 基于PTS缺陷型大肠杆菌构建莽草酸生产菌被引量：6
- 2011年
- 对大肠杆菌芳香族氨基酸合成途径进行代谢流改造,以实现高效的生物制备莽草酸。以磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PTS系统)敲除菌DH5α△ptsHIcrr(DHP)为基础,特异性敲除aroL、ydiB基因并转入受阿拉伯糖诱导表达的T7-RNA聚合酶基因,最终构建一系列产莽草酸宿主菌。再将aroE、aroB、tktA、glk、aroFfbr组成的系列基因串联起来置于质粒上,在T7启动子控制下表达,经摇瓶培养检测得知,不同重组菌产莽草酸能力与对照相比均有明显提高,其中DHPYA-T7/pAOC-TGEFB菌株产量最高,可达到392 mg/L。为进一步构建高表达莽草酸工程菌奠定基础。
- 邹永康周军智孙旭蔡亚非戴红梅李树龙周长林方宏清
- 关键词：莽草酸
- 大肠杆菌ptsHIcrr操纵子的快速敲除及敲除菌生长性能测定被引量：5
- 2010年
- 敲除大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(简称PTS系统)ptsHIcrr操纵子,考察敲除菌株生长特性并将其与ptsG敲除菌进行比较。利用I-SceⅠ特异性切割和Red同源重组方法成功构建了大肠杆菌DH5α△ptsHIcrr敲除菌。在LB培养基中,DH5α△ptsHIcrr的生长行为与DH5α和DH5α△ptsG明显不同,其最高菌密度是DH5α和DH5α△ptsG的近2倍,而DH5α△ptsG生长行为与DH5α无明显差异。但在含1%葡萄糖的LB中,DH5α△ptsHIcrr和DH5α△ptsG均表现出生长优势,最高菌密度依次是DH5α的2.8和2倍;培养液中最终乙酸含量分别是DH5α的12.2%、47%。在M9修饰培养基中,DH5α△ptsHIcrr比生长速率(1/h)和比葡萄糖消耗速率[g/(g.h)]明显低于DH5α,并略低于DH5α△ptsG。结果说明,ptsHIcrr操纵子敲除菌改变了葡萄糖的代谢速率,并呈现与ptsG基因敲除菌不同的代谢特点。
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- 关键词：RED同源重组大肠杆菌
- 一株生产莽草酸的重组大肠杆菌及其构建方法
- 本发明涉及一株生产莽草酸的重组大肠杆菌及其构建方法。本发明涉及了一种构建莽草酸生产菌株的新策略，本发明首次发现敲除ydiB基因可以提高莽草酸产量。通过敲除ptsHIcrr操纵子、ydiB基因、shiA基因以及aroL基因...
- 方宏清邹永康陈凯孙旭蔡钒戴红梅李树龙周长林
- 文献传递
- 含PGK启动子慢病毒表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2009年
- 为了构建一个含有人源PGK1(human phosphoglycerate kinase 1)启动子的慢病毒表达载体pL-PGK-GFP.采用PCR从人组织中扩增PGK1基因的启动子部分,再用酶切-连接的方法将扩增的启动子区片段亚克隆入慢病毒表达质粒pL-EGFP中,再用测序、酶切和瞬时表达的方法进行鉴定.结果是下游的eGFP基因在PGK1启动子驱动下,在293FT细胞中表达绿色荧光蛋白报告基因,这表明成功构建了慢病毒表达质粒pL-PGK-GFP.扩增的537bp PGK1启动子片段具有一定的启动效率,能在HIV来源的慢病毒载体中驱动下游目的基因的表达.
- 周军智邹永康李建国刘楠乔蔡亚非王根林
- 关键词：慢病毒载体基因表达
