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Burkholderia cepacia中具有解脂作用的胆固醇酯酶的酶学特性被引量：2: 2019年; 为了更好地应用于工业领域,系统研究Burkholderia cepacia ZWS15胆固醇酯酶(EC 3.1.1.13 cholesterol esterase,CHE)的酶学特性。通过DEAE离子交换从该菌发酵液中获得一种CHE,并探讨其有机溶剂与表面活性剂耐受性,以及底物水解特性。CHE在pH 5.5~9.0保持稳定,最适反应温度为40℃,在70℃温育2 h仍能保留70%以上的酶活,具有显著耐热性;在50%(体积分数)有机溶剂或5%(体积分数)表面活性剂存在下也具有较高酶活。飞行时间质谱鉴定该酶分子质量为37 kDa,其与胆固醇酯酶(源于洋葱伯尔霍尔德菌,Burkholderia cepacia)及脂肪酶(源于假单胞菌属,Pseudomonas sp.)具有较高匹配度。与商品化酶相比,CHE不仅具有胆固醇酯酶活性(对长链胆固醇酯类底物有明显偏好性),还具有解脂功能(可作用于三酰基甘油酯及对硝基苯酯)。该酶的优良性能可为其在食品、诊断、制浆造纸等领域的工业应用提供参考与借鉴。; 孙柳青吴梦棋张玲武迪辛瑜杨海麟; 关键词：BURKHOLDERIA 热稳定性有机溶剂耐受性

嗜热脂肪酶-无机杂化纳米花的制备及其性能研究被引量：4: 2022年; 为满足工业生物催化需求,寻求一种简单、快捷、有效的脂肪酶固定化方法来扩大其实际应用范围。采用声化学方法,在10 min内将脂肪酶固定于由磷酸铜沉淀所构成的无机杂化纳米花中,并进一步通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)和傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)等技术对制备的脂肪酶杂化纳米花进行表征。随后,研究了不同金属离子、金属盐离子类型、合成条件对脂肪酶杂化纳米花活性的影响。结果表明,Cu^(2+)可实现最佳固定化效果,且不同含铜无机盐类型对所形成的杂化纳米花活性存在影响。其中,使用CuSO_(4)合成纳米花可实现100%的包封率,而CuCl_(2)可使最终合成的纳米花相对酶活力达到145.7%。酶动力学研究结果表明,CuSO_(4)和CuCl_(2)纳米花的催化效率(k_(cat)/K_(m))分别是游离酶的106%和134%。此外,该固定化方法可有效提高固定化酶的储藏稳定性,在室温下储藏30 d其酶活力仍能保持在80%以上。在重复使用性研究中发现,固定化酶在连续使用5次后仍具有40%以上的催化活性。该研究结果有助于提高脂肪酶在工业生产中的适用性,并为其在生物柴油合成、洗涤剂及高温生产环境等多方面领域的应用奠定基础。; 刘振山时祎陈剑雄辛瑜辛瑜张梁; 关键词：脂肪酶固定化催化活性稳定性

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立: 2015年; 以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。; 刘婷冯守帅辛瑜王武杨海麟; 关键词：芽孢杆菌属 RNA

重组大肠杆菌分泌表达鼠源羧肽酶B及其培养基优化被引量：1: 2020年; 为了简化纯化步骤,节约生产成本,笔者构建了能够胞外分泌鼠羧肽酶原B(proCPB)的重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-OmpA-proCPB,并进行发酵优化。结果表明:在信号肽OmpA的引导下,proCPB成功分泌至胞外,激活后的羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB)比酶活为131.22 U/mg。通过单因素及正交试验对发酵工艺进行优化,得出最佳培养基组合为甘油7 g/L、复合氮源15 g/L、MgSO_44 mmol/L、山梨醇0.3 mol/L、NaCl 10 g/L;最佳发酵条件为诱导温度30℃,诱导时间24 h。优化后,胞外proCPB的相对表达量为6.35(优化前的相对表达量为1)。首次实现了鼠羧肽酶原B在大肠杆菌中的胞外分泌表达,为羧肽酶B的工业化直接应用提供了一定的技术支持。; 於瑞梅辛瑜顾正华顾正华李由然丁重阳李由然张梁; 关键词：羧肽酶B 分泌表达大肠杆菌发酵优化

嗜热玫瑰红球菌来源谷氨酰胺酶的重组表达与酶学性质研究: 2025年; 极端环境微生物是发掘性能优良新酶的重要资源,其中高稳定性的酶类在工业生产中具有巨大的潜在应用价值。该研究通过异源重组表达了嗜热玫瑰红球菌(Thermomicrobium roseum DSM 5159)来源的一段预测谷氨酰胺酶基因,并对其酶学性质进行了研究。利用镍柱亲和层析纯化表达产物,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定纯化结果,分析了重组酶的催化功能,以正交试验优化了表达条件,考察了重组酶的酶学性质。结果表明,重组谷氨酰胺酶的二级结构由35.78%α-螺旋,14.07%β-折叠,16.06%β-转角以及34.19%无规则卷曲组成,热变性温度(T_(m))和变性焓(ΔH)分别为94.38℃和1672 kJ/mol,以L-谷氨酰胺为底物时,最适反应温度为70℃,最适反应pH值为9.0,70℃以下酶活力半衰期大于12 h,其耐热性能良好,动力学研究表明重组谷氨酰胺酶对L-谷氨酰胺的亲和力高于D-谷氨酰胺,Mn^(2+)、Fe^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Co^(2+)对酶活力有明显抑制作用。对嗜热古生菌来源的谷氨酰胺酶的结构及酶学性质的研究为挖掘开发具有优良热稳定性的工业生产用酶类提供了一定的参考价值。; 徐雯王亚楠辛瑜张梁顾正华; 关键词：谷氨酰胺酶酶学性质

保护剂对胆固醇氧化酶稳定性机理的研究被引量：3: 2013年; 利用荧光光谱、圆二色性光谱及凝胶电泳等方法,研究液态胆固醇氧化酶失活机理。根据失活机理,选择添加两种不同保护剂提高酶稳定性,研究提高酶稳定性的机理。37℃下,添加15%甘油的液态酶稳定性较佳,45 h后酶活保留率提高58%,核黄素对酶基本无保护作用。经研究分析,甘油主要通过有效抑制分子间聚集,维持二级结构,增强酶稳定性;核黄素不能抑制酶自身聚集,对酶保护作用不明显。; 陈亦辛瑜杨海麟张玲张玉然仝艳军王武; 关键词：胆固醇氧化酶稳定性保护剂

《蛋白质纯化技术》理论与实验课程教学探索: 2019年; 《蛋白质纯化技术》课程是大学生物学科教学中的一门较为特殊的课程,是生物学的下游技术集成,也是多学科的交叉。论文针对《蛋白质纯化技术》课程,进行了课程教学的探索与改革,构建了贴近领域前沿的开放性教学模式,由教师引导学生自主选择浸入,进行对等式的教学,帮助学生完成差异性的特色鲜明的实验自主设计。; 辛瑜; 关键词：开放式教学

氨基化大孔硅胶共价固定Pancreas porcine脂肪酶的研究被引量：2: 2013年; 本研究以大孔硅胶为材料,对其进行环氧基和氨基两步活化,然后利用碳化二亚胺(EDC)将氨基化硅胶与Pancreas porcine脂肪酶(PPL)进行共价固定化。通过优化固定化条件,在EDC与蛋白摩尔比为50:1;载体与粗酶质量比为10:1,固定化pH为6.0,固定化时间为8 h的条件下获得最大固定化酶酶活为86.67 U/g,远远高于未修饰硅胶物理吸附固定PPL所得固定化酶酶活(33.33U/g)。此外,本文还利用扫描电镜(SEM)和傅立叶变换光谱仪(FT-IR)对固定化前后硅胶进行了结构表征,固定化后硅胶表面出现明显的丝状蛋白,且固定化酶在1543 cm-1处出现酰胺Ⅱ带,说明PPL成功共价固定于氨基化硅胶上。通过对所得固定化酶性质进行分析,结果表明,固定化酶最适反应pH向碱偏移一个单位,最适反应温度提高了5℃,热稳定性明显提高。; 温小荣夏小乐杨海麟辛瑜; 关键词：PANCREAS 碳化二亚胺酶活

不同功能单体合成的谷胱甘肽分子印迹聚合物的研究被引量：3: 2012年; 采用分子印迹技术,以谷胱甘肽为模板分子,以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备分子印迹聚合物;通过静态吸附试验,探讨了合成分子印迹聚合物时模板分子与功能单体的物质的量比、上样液pH值、吸附平衡时间、上样液浓度对聚合物吸附性能的影响;实验结果表明:以丙烯酰胺、甲基丙烯酸为功能单体制备谷胱甘肽分子印迹聚合物时,谷胱甘肽与丙烯酰胺、甲基丙烯酸的最适摩尔比分别为1∶5和1∶4,以及最适静态吸附条件为:上样液pH值分别为3.0和5.0左右;上样液浓度分别为1.50～2.00 g/L和1.00～1.50 g/L;静态吸附平衡时间为18和20 h左右.同时也探讨了分子印迹聚合物对谷胱甘肽结构类似物的吸附性能,结果表明,所合成的分子印迹聚合物对谷胱甘肽具有良好的选择性吸附能力.同时也研究了分子印迹聚合物对酵母抽提物中谷胱甘肽的吸附性能,以丙烯酰胺和甲基丙烯酸为功能单体制备的分子印迹聚合物对混合体系中谷胱甘肽的一次性提取率分别为41%和77%.分子印迹聚合物均表现出了较好的吸附特性,为分离提纯谷胱甘肽提供一种可选择的途径.; 辛瑜仝艳军杨海麟张玲张玉然陈亦王武; 关键词：分子印迹谷胱甘肽

蜡样芽胞杆菌磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中重组表达、纯化及酶学性质分析被引量：5: 2017年; 【目的】构建蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析。【方法】以B.cereus基因组DNA为模板,PCR扩增得到磷脂酶C基因(bcplc),构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒并转化到乳酸克鲁维酵母中,实现bcplc基因的表达。利用镍柱亲和层析纯化和脱盐柱得到电泳纯的重组磷脂酶C(rbcPLC)。【结果】成功构建产磷脂酶C的重组乳酸克鲁维酵母并纯化了重组磷脂酶C,纯化后rbcPLC经SDS-PAGE分析在40 kDa附近出现显性条带。NPPC法测得rbcPLC酶活为19251 U/mg,最适反应温度为80°C,最适pH为9.0。在低于40°C时,pH 7.0-8.0时,rbcPLC重组酶较稳定。Cu^(2+)和Co^(2+)对其有明显的抑制作用;Zn^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Mg^(2+)对其有明显的促进作用。【结论】首次实现了对蜡样芽胞杆菌来源的磷脂酶C在乳酸克鲁维酵母中的重组表达、纯化及其酶学性质分析,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了借鉴意义。; 肖超张梁李颜颜辛瑜陈国安杨盛荣; 关键词：蜡样芽胞杆菌乳酸克鲁维酵母纯化酶学性质

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辛瑜

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