蔡向荣
- 作品数：3 被引量：32H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 桑蚕金属硫蛋白基因在大肠杆菌中的克隆和表达被引量：7
- 2000年
- 用BamHⅠ和SacⅠ双酶切质粒 pCM1 1 ,获得酵母的MTI基因片段 ,用非放射性地高辛标记作为探针。提取桑蚕肥苏蚕卵的总DNA ,分别用EcoRⅠ、BamHⅠ和HindⅢ酶切 ,与MTI探针进行Southern杂交 ,出现较强的杂交信号。然后用EcoRⅠ完全酶切桑吞的总DNA ,电洗脱法回收 1～ 6kb的染色体片断 ,与EcoRⅠ酶切的M1 3- 载体以 3∶1比例连接 ,转化受体菌DH5α。筛选到 40 0 0多个白色转化子 ,与探针MTI进行Southern杂交筛选阳性转化子 ,选择到有强杂交信号的三个转化子 [编号为T1 ( pZHC 1 )、T5( pZHC 5)、T7( pZHC 7) ]。用 1 2种限制性内切酶对 pZHC 5重组质粒进行酶切分析表明插入片段约 1 2kb ,在基因内有一个HindⅢ位点。抗性测定表明受体菌DH5α在含有 5 0mmol/LCuSO4的培养基上生长 ,在含有 5 2mmol/LCuSO4的培养基上不生长 ,而转化子确能在含有 5 2mmol/LCuSO4以上的培养基上生长。上述研究结果表明 1 2kb左右的插入片段含有桑吞的金属硫蛋白基因。
- 何秀萍蔡向荣怀文辉张博润
- 关键词：桑蚕金属硫蛋白基因克隆基因表达
- 金属硫蛋白的研究进展及应用前景被引量：26
- 1999年
- 张博润蔡向荣怀文辉何秀萍
- 关键词：金属硫蛋白物化特性基因克隆
- 光滑球拟酵母金属硫蛋白基因的亚克隆和表达研究被引量：3
- 1999年
- 用BamHI和PstI双酶切质粒pMTIIa－91s，获得光滑球拟酵母金属硫蛋白基因（MTIIa）片段，将其亚克隆到M13载体，扩增并回收MTIIa基因片段，经Southern杂交验证插入片段正确后，分别将MTIIa基因片段插入到大肠杆菌表达载体pBV220和大肠杆菌一酵母菌穿梭载体YIp352中，转化大肠杆菌DH5a，使其对CUSO4的抗性提高0．7mol／L左右；转化酿酒酵母受体菌YS59，使YS59对CUSO4的抗性提高1．5mol／L左右。结果证明光滑球拟酵母MTIIa基因在大肠杆菌和酿酒酵母中都获得高效表达。
- 张博润蔡向荣何秀萍铁翠娟
- 关键词：光滑球拟酵母金属硫蛋白基因
