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桂林地区乙肝患者HBVB基因亚型分布研究: 2012年; 目的:研究桂林地区乙肝患者HBV B基因亚型分布特点,为本地区乙型肝炎的防治提供依据。方法:采用巢式PCR技术扩增乙肝患者HBV的S基因,经测序后与标准序列比对,采用Mega 5.0构建系统树进行基因亚型分型。结果:从120例乙肝病毒患者中鉴定出3个以前报告的乙肝病毒亚型,序列分型B2 104例,占86.7%;B4 1例,占0.8%;B5 1例,占0.8%,其中14例未分出亚型,占11.7%。结论:桂林地区HBV B基因亚型主要以B2为主,其次为B4、B5,未发现B1、B3、B6亚型。; 陈容娟梁伟秋杨媛黄城王慧敏朱广超刘永明苏何玲; 关键词：乙型肝炎病毒 S基因

肝细胞癌患者石蜡包埋肝组织HBV ccc DNA的检测被引量：3: 2013年; 目的检测肝细胞癌患者肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV ccc DNA),探讨其在肝细胞癌发生、发展中的意义。方法选取20例肝细胞癌患者的癌及癌旁组织,经10%福尔马林固定、石蜡包埋、连续切片,采用0.05%多聚赖氨酸进行处理。经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,应用原位滚环扩增(insitu RCA)结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中ccc DNA的表达。结果 20例肝癌患者标本中有17例检测到HBV ccc DNA阳性信号,为蓝色或紫蓝色并呈团块状,定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV ccc DNA阳性率分别为10%(2/20)和85%(17/20),差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。; 胡双烨徐晨赵雨来李智彬徐东平刘永明杨媛赵景民成军苏何玲侯俊钟彦伟; 关键词：共价闭合环状DNA 肝细胞癌

酵母双杂交技术筛选HCV E1蛋白结合的肝细胞蛋白基因被引量：1: 2004年; 目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与HCV E1蛋白结合蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV E1基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序, 进行生物信息学分析. 结果:获得了19个与E1蛋白特异陛结合的阳性克隆,其中16个克隆为已知蛋白基因和3个克隆为未知功能蛋白基因. 结论:成功克隆出与丙型肝炎病毒E1蛋白结合的肝细胞蛋白,为进一步研究HCV E1在HCV致病中的作用提供了新线索.; 陈天艳蔺淑梅成军王琳张树林刘敏王建军黄燕萍杨媛白桂芹; 关键词：酵母双杂交技术肝细胞蛋白基因

酵母双杂交技术筛选α干扰素结合蛋白的基因被引量：1: 2006年; 目的筛选人肝细胞cDNA文库中与α干扰素(IFNα)蛋白具有相互作用的蛋白基因。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增IFNα基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转染酵母细胞AH109,Western blot证明IFNα蛋白能够在AH109中表达。然后将AH109与转染了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,提取质粒后转化DH5α大肠埃希菌并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定正确者进行测序,再行生物信息学分析。结果成功克隆化IFNα基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选出阳性菌落34个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到8种已知基因:玻璃体连接蛋白、纤维蛋白原α多肽、人类免疫缺陷病毒(HIV)1Tat相互作用蛋白2、精氨酸酶、NADH脱氢酶1β亚复合物、转铁蛋白受体2α、酒精脱氢酶IBβ多肽、肝细胞癌蛋白(HCC-1);2种染色体基因:人染色体17,克隆RP11-350B3,人染色体10,克隆RP11-351O1。结论成功克隆出IFNα基因,并从肝细胞cDNA文库中筛选出8种能与IFNα具有结合作用的蛋白基因。; 曲建慧成军张玲霞钟彦伟杨媛郭江张黎颖刘妍王琳戴久增徐东平; 关键词：干扰素Α 双杂交系统技术基因

乙型肝炎病毒HBeAg上调S100钙结合蛋白A11基因启动子表达活性的研究被引量：1: 2004年; 目的　探讨乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)对S10 0钙结合蛋白A11(calgizzarinS10 0A11)启动子转录的激活作用。方法　以我室构建的HBeAg反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交 (SSH)筛选结果为基础 ,利用生物信息学技术确定S10 0A11的启动子区域 (S10 0A11 p) ,聚合酶链反应 (PCR)扩增S10 0A11 p ,克隆至真核报告载体PCAT3中 ,构建pCAT3 S10 0 p报告载体 ,以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性 ,并与pcDNA3 .1( -) HBeAg共转染HepG2细胞系 ,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果　pCAT3 S10 0 p在HepG2细胞中能够指导CAT的表达 ;共转染实验中pCAT3 S10 0 P pcDNA3 1( -) HBeAg组CAT的表达活性是pCAT3 S10 0 p组的 6 1倍。结论　我室克隆的S10 0A11启动子有顺式激活下游基因的活性 ,HBeAg具有对S10 0A11的反式激活作用。; 刘蔚成军张连峰纪冬洪源王建军杨媛; 关键词：S100 钙结合蛋白共转染反式激活作用乙型肝炎病毒表达活性

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杨媛