张亚兰
- 作品数：15 被引量：37H指数：6
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中法先进研究计划项目吉林省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的表达与抗原性分析被引量：8
- 2005年
- 目的 对旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因进行原核表达并检测重组抗原的抗原性。 方法 利用聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,克隆到原核表达载体 pET 2 8a ,构建重组表达质粒 ,经酶切及测序鉴定后转化大肠埃希菌BL2 1(DE3 ) ,以异丙基 β D 硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、酶联免疫吸附测定 (ELISA)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)分析表达产物。 结果 SDS PAGE结果显示表达产物的分子量约为Mr 480 0 0 ,与理论值相符。ELISA和Westernblotting结果表明 ,重组蛋白可被旋毛虫感染的猪血清和兔抗重组蛋白血清识别 ;兔抗重组蛋白血清可识别旋毛虫新生幼虫抗原Mr 460 0 0蛋白。 结论 成功表达了旋毛虫新生幼虫p460 0 0抗原基因 ,重组抗原具有良好的抗原性。
- 原丽红付宝权刘明远高飞张亚兰吴秀萍林本夫李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：抗原基因旋毛虫重组抗原抗原性分析SDS-PAGE猪血清
- 旋毛虫新生幼虫p46000抗原基因的克隆及序列分析被引量：7
- 2005年
- 应用旋毛虫感染猪血清 ,对旋毛虫新生幼虫 c DNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆 p BK- CMV- WN10的序列分析结果表明 ,c DNA全长为 135 2 bp,含有 1个 12 18bp的完整的开放阅读框架 (ORF) ,编码的多肽由 4 0 6个氨基酸残基组成 ,其相对分子质量理论推导值为 4 5 90 0 ,等电点为 5 .4 3,N末端的信号肽及糖基化位点 (NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白 ,氨基酸序列 19～ 15 6与 15 8～ 2 95为重复区域 ,相似性为 74 % ,C末端有 1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域 ,但旋毛虫 p4 6 0 0 0抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异 ,可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。 PCR结果显示 ,从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和 5日龄成虫 c DNA中均扩增出此基因 。
- 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫抑制蛋白半胱氨酸蛋白酶抗原基因分泌性肌幼虫
- 旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析
- 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA 文库进行了免疫筛选,从1.6×10～5个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆.阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫...
- 付宝权原丽红张亚兰吴秀萍李莲瑞卢强刘明远陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫肌幼虫CDNA文库免疫筛选
- 文献传递
- 旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析
- 应用感染旋毛虫猪血清,对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行了免疫筛选,对阳性克隆pBK-CMV-WN10的序列分析结果表明,cDNA 全长为1352 bp,含有1个1218 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多肽...
- 付宝权吴秀萍刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂
- 文献传递
- 旋毛虫感染小鼠对p46000重组抗原的抗体应答被引量：1
- 2006年
- 分别以旋毛虫肌幼虫ES抗原和p46000重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA检测。结果表明，以肌幼虫200条／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后9d可检出抗体，并于感染后35～42d达到最高水平；应用重组抗原检测时，感染后10d可检出抗体，抗体水平略低于用ES抗原，但是其消长规律基本一致．而且与阴性血清相比差异明显；抗体在117d后仍维持于较高水平。
- 原丽红付宝权刘明远林本夫张亚兰吴秀萍卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫ELISA抗体应答
- 旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa抗原基因重组融合蛋白对小鼠的免疫保护性研究
- 目的探讨旋毛虫编码新生幼虫p46 kDa 抗原基因重组融合蛋白WN10对小鼠的免疫保护性。方法将纯化的重组融合蛋白WN10以20μg/只的剂量分三次免疫小鼠后,攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只,检查旋毛虫7日龄成虫数、雌...
- 原丽红付宝权刘明远张亚兰吴秀萍李莲瑞林本夫卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫重组融合蛋白保护性免疫
- 文献传递
- 旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选被引量：18
- 2004年
- 目的 获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。 方法 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序及分析。 结果 从 4 5× 10 5旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得 15 8个阳性克隆。序列分析结果表明 ,其中有 3 6个新的cDNA序列 ,已报道的序列有 5个 ,有 12个序列无开放阅读框架 (ORF) ,与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。
- 吴秀萍付宝权刘明远张亚兰原丽红李莲瑞卢强Pascal Boireau
- 关键词：旋毛虫感染免疫筛选CDNA文库开放阅读框架猪血清线粒体基因组
- 旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选
- 目的获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因方法以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序及分析.结果从4.5×10～5旋毛虫新生幼虫cDNA 文库重组子中共获得158个...
- 吴秀萍付宝权刘明远张亚兰原丽红李莲瑞P.Boireau
- 关键词：旋毛虫CDNA文库免疫筛选
- 文献传递
- 旋毛虫新生幼虫WN1抗原基因的克隆及表达
- 应用旋毛虫人工感染猪血清对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行免疫筛选,对阳性克隆WN1 序列进行生物信息学分析,结果表明,WN1 cDNA 全长为474 bp,含有一个354 bp 的完整的开放阅读框架(ORF),编码的多...
- 高长玲付宝权刘明远原丽红吴秀萍张亚兰李莲瑞卢强陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫基因克隆
- 文献传递
- 旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析被引量：7
- 2004年
- 用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。
- 付宝权原丽红张亚兰吴秀萍李莲瑞卢强刘明远陈启军P.Boireau
- 关键词：旋毛虫肌幼虫CDNA文库免疫筛选
