孙彦
- 作品数：10 被引量：22H指数：2
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- 靶向hTERT的RNAi载体的构建及其对大肠癌SW-480细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的:构建靶向人大肠癌细胞端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的RNAi载体,探讨其对人大肠癌SW480细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向hTERT的shRNA序列和阴性对照序列,分别克隆入pGPU6/GFP/Neo载体,构建RNAi载体pGPU6-hTERT-1、2、3和阴性对照载体pGPU6-hTERT-NC,转染SW480细胞。RT-PCR检测各组载体对hTERT mRNA表达的影响,MTT法检测下调hTERT mRNA表达对SW480细胞增殖的影响。结果:成功构建3个携带hTERT mRNA序列的重组载体,3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞hTERT mRNA的表达,pGPU6-hTERT-3组SW480细胞hTERT mRNA表达水平较空白对照组下调最为显著(0.347±0.028 vs 0.513±0.032,P<0.01)。转染3种RNAi载体均能明显抑制SW480细胞增殖,pGPU6-hTERT-3组细胞增殖抑制率较空白对照组、脂质体对照组和pGPU6-hTERT-NC组升高最为显著[(50.08±0.43)%vs(4.11±0.39)%、(3.88±0.35)%、(3.38±0.35)%,P<0.05]。结论:转染RNAi载体pGPU6-hTERT-3能够抑制SW480细胞的增殖,其机制可能与降低hTERT基因的表达从而抑制端粒酶活性有关。
- 孙彦孟永亮
- 关键词：大肠癌人端粒酶逆转录酶SW-480细胞
- 不同培养方法骨髓破骨细胞样细胞分化及活性的实验观察被引量：2
- 2006年
- 目的研究不同骨髓细胞培养方法对大鼠破骨细胞样细胞(OLC)诱导分化及活性的影响。方法大鼠骨髓细胞以巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)作用后与核因子!B受体活化因子配体(RANKL)协同诱导OLC分化,采用全骨髓细胞(A组)及密度梯度离心后骨髓单个核细胞(B组)两种培养方法,通过倒置相差显微镜及细胞染色观察两组OLC分化数量的差异,通过骨吸收陷窝分析及OLC膜表面整合素#3(CD61)表达量比较两组OLC活性的差异。结果B组培养5、7d抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性多核OLC数量及TRAP活性均高于A组,骨吸收陷窝计数亦较A组为多,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);陷窝面积比培养早期两组比较差异无统计学意义,7d时B组大于A组,差异有统计学意义(P<0.01);OLC膜表面CD61表达量及平均荧光强度0及3d时B组均较A组明显增高,随培养时间延长组间比较差异无统计学意义。结论低转速、短时间密度梯度离心后骨髓细胞培养诱导OLC分化获得的细胞数量较多且不影响其活性,是一种简便有效的OLC培养方法。
- 朱亦堃乔振华赵嘉慧朱镭孙彦李兴赵宝珍
- 关键词：细胞培养技术破骨细胞细胞分化骨髓
- 葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞分化的影响被引量：2
- 2007年
- 目的观察葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞(OC)分化的影响,探讨糖尿病骨质疏松的发病机制。方法用巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为OC,同时给予不同浓度的葡萄糖(0、5.5、15、25mmol/L)干预,通过观察抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性OC数、TRAP活性测定、OC膜表面RANKmRNA表达量来分析葡萄糖对OC分化的影响。结果高糖(25mmol/L)组培养7d时TRAP染色阳性OC数及TRAP活性测定均高于对照组(0mmol/L)、葡萄糖5.5mmol/L组(P<0.01);与对照组相比高糖组培养3d时TRAP染色阳性OC数明显增多(P<0.01);葡萄糖呈浓度依赖性上调OC膜表面RANKmRNA的表达,其中高糖组培养的各时间点与其他三组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论高糖可促进OC的分化,其促进作用始于诱导分化的早期;骨髓微环境中高糖可引起OC分化增多,可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一。
- 孙彦李兴朱亦堃
- 关键词：葡萄糖破骨细胞细胞分化糖尿病骨质疏松
- 葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞骨吸收陷窝的影响
- 2009年
- 目的:观察葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞(Osteoclasts OC)骨吸收功能的影响,探讨糖尿病骨质疏松的发病机制。方法:用M-CSF、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为OC,同时给予不同浓度的葡萄糖(0、5.5、15、25mmol/L)干预,通过观察骨吸收陷窝数量和面积比分析葡萄糖对破骨细胞骨吸收陷窝的影响。结果:高糖(25mmol/L)组培养7天时骨吸收陷窝数量和面积比与其它3组相比差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:高糖可增强破骨细胞的骨吸收功能,其可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一。
- 孙彦孟永亮
- 关键词：葡萄糖破骨细胞骨吸收糖尿病骨质疏松
- 葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞骨吸收功能的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞骨吸收功能的影响，探讨糖尿病骨质疏松的发病机制。方法用巨噬细胞集落刺激因子、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为破骨细胞，同时给予不同浓度的葡萄糖（0、5．5、15、25mmol/L）干预，通过观察骨吸收陷窝数量和面积比及破骨细胞膜表面整合素ανβ3（CD61）表达水平分析葡萄糖对破骨细胞骨吸收功能的影响，结果（1）高糖（25mmol/L）组培养7d骨吸收陷窝数量和面积比与其他3组相比明显增多（P〈0．05或P〈0．01）。（2）高糖组破骨细胞膜表面CD61表达量及平均荧光强度3d时与其他3组相比均明显上调（P〈0．05或P〈0．01）；5、7d时与对照组（0mmol/L）相比明显上调（P〈0．05）。结论高糖可增强破骨细胞的骨吸收功能，这可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一。
- 孙彦李兴朱亦堃
- 关键词：葡萄糖破骨细胞骨吸收糖尿病骨质疏松
- 葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞分化及活性的影响
- 本文论述了葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞分化及活性的影响，全文分为两部分：
第一部分：大鼠骨髓破骨细胞样细胞的体外培养。
研究目的：建立体外破骨细胞样细胞(osteoclast-like cell，OLC)...
- 孙彦
- 关键词：骨质疏松葡萄糖破骨细胞
- 文献传递
- 阿霉素对sw480细胞端粒酶活性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察不同浓度阿霉素对大肠癌sw480细胞端粒酶活性的影响,探讨不同阿霉素作用浓度与端粒酶活性之间的关系,进而探讨阿霉素通过稳定G-四联体达到抑制肿瘤细胞增殖的可能性。方法培养sw480细胞,取对数生长期sw480细胞制成不同浓度细胞悬液,通过MTT法测定不同浓度阿霉素对sw480细胞的增殖抑制率;通过PCR-TRAT-Elisa检测不同浓度阿霉素作用下大肠癌sw480细胞的端粒酶活性。结果 MTT结果显示,阿霉素抑制sw480细胞增殖具有浓度和时间依赖性;随着阿霉素处理作用时间延长,实验组细胞端粒酶活性逐渐降低,72h后达到最低。结论阿霉素抑制sw480细胞端粒酶活性具有明显的时间和浓度依赖性,其机制可能与阿霉素稳定G四联体有关。
- 孟永亮孙彦罗小玲
- 关键词：阿霉素SW480细胞端粒酶
- 阿霉素诱导G-四联体形成对SW480细胞端粒酶活性的影响
- 2014年
- 目的探讨G-四联体结构的生物学功能及其阿霉素诱导鸟嘌呤四联体形成对SW480细胞端粒酶活性的影响。方法通过MTT法测定不同浓度阿霉素(0,2.5,5,10,20μg/ml)对SW480细胞的增殖抑制率;通过PCR-TRAP-ELISA检测不同浓度阿霉素对大肠癌SW480细胞端粒酶活性的影响;通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移实验分析阿霉素对鸟嘌呤四联体结构及其相似物的影响。结果阿霉素抑制SW480细胞的增殖,且随阿霉素浓度升高和作用时间延长,抑制作用逐步增强;阿霉素降低SW480细胞端粒酶活性;阿霉素可使端粒序列重复4次及以上的含GGG串联区的线性核苷酸结构发生改变,形成紧凑的二级结构,导致迁移速度加快。结论阿霉素抑制SW480细胞的增殖,降低其端粒酶活性,其机制可能与阿霉素诱导G-四联体形成有关。
- 孙彦孟永亮
- 关键词：阿霉素SW480细胞端粒酶
- 不同浓度葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞分化的影响被引量：14
- 2007年
- 目的观察不同浓度葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞(Osteoclasts OC)分化的影响,探讨糖尿病骨质疏松的发病机制。方法用M-CSF、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为OC,同时给予不同浓度的葡萄糖(0、5.5、15、25mmol/L)干预,通过观察抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性OC数、TRAP活性测定、OC膜表面RANK mRNA表达量来分析葡萄糖对破骨细胞分化的影响。结果①高浓度葡萄糖组(25mmol/L)培养7d时TRAP染色阳性OC数及TRAP活性测定均高于对照(0mmol/L)组、葡萄糖5.5mmol/L组(P<0.01);与对照组比较高浓度葡萄糖组培养3d时TRAP染色阳性OC数明显增多(P<0.01)。②葡萄糖呈浓度依赖性上调OC膜表面RANK mRNA的表达,其中高浓度葡萄糖组培养的各时间点与其他3组比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论①高浓度葡萄糖可促进破骨细胞的分化,其促进作用始于诱导分化的早期。②骨髓微环境中高浓度葡萄糖可引起OC分化增多,可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一。
- 孙彦李兴朱亦崑
- 关键词：葡萄糖破骨细胞细胞分化糖尿病骨质疏松
