顾正华
- 作品数：64 被引量：308H指数：9
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程环境科学与工程更多>>
- 杨氏柠檬酸杆菌磷脂酶A1基因在E.coli中的表达
- 2015年
- 为实现磷脂酶A1(PLA1)的异源表达,将杨氏柠檬酸杆菌(CICC No.21596)PLA1基因插入载体p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p ET28a(+)-pla1,并将重组质粒转入宿主菌E.coli BL21(DE3)中,获得重组菌p ET28a(+)-pla1/DE3。在IPTG诱导作用下经SDS-PAGE检测,发现在重组菌发酵破碎上清液中存在33 000大小的蛋白质,与预期蛋白质大小相符。在硼砂卵黄平板上对重组菌PLA1活性进行检测,结果显示重组菌具有明显的PLA1活性,表明PLA1基因在大肠杆菌中得到了表达。经发酵初步优化,获得摇瓶发酵的最佳诱导表达条件为:转接体积分数4%、诱导时机2 h、IPTG终浓度为0.4 mmol/L、37℃诱导培养8 h。经酸碱滴定法测得最高酶活为(5.6±0.2)U/m L。
- 姚其玉张梁石贵阳顾正华丁重阳
- 关键词：磷脂酶A1大肠杆菌
- 液态型凝乳酶储藏条件的初步研究
- 2014年
- 为进一步延长液态型凝乳酶的储藏时间,以金属离子、糖类、多羟基醇、大分子助剂和表面活性剂等为稳定剂优化得到最优的复合保护剂配方:山梨醇7.5%、明胶1%、甘油15%、吐温400.25%、氯化钾50 mmol/L;添加0.1 g/L对羟基苯甲酸乙酯可有效抑制在储藏过程中由杂茵繁殖导致的发臭、浑浊。添加复合保护剂和防腐剂的液态型凝乳酶,室温放置90 d,凝乳酶活力保留率为80.8%,比对照组提高41.6%。
- 王清伟丁明亮丁重阳顾正华张梁石贵阳
- 关键词：凝乳酶保护剂防腐剂稳定性
- 嗜热脂肪酶-无机杂化纳米花的制备及其性能研究被引量：4
- 2022年
- 为满足工业生物催化需求,寻求一种简单、快捷、有效的脂肪酶固定化方法来扩大其实际应用范围。采用声化学方法,在10 min内将脂肪酶固定于由磷酸铜沉淀所构成的无机杂化纳米花中,并进一步通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)、X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)和傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)等技术对制备的脂肪酶杂化纳米花进行表征。随后,研究了不同金属离子、金属盐离子类型、合成条件对脂肪酶杂化纳米花活性的影响。结果表明,Cu^(2+)可实现最佳固定化效果,且不同含铜无机盐类型对所形成的杂化纳米花活性存在影响。其中,使用CuSO_(4)合成纳米花可实现100%的包封率,而CuCl_(2)可使最终合成的纳米花相对酶活力达到145.7%。酶动力学研究结果表明,CuSO_(4)和CuCl_(2)纳米花的催化效率(k_(cat)/K_(m))分别是游离酶的106%和134%。此外,该固定化方法可有效提高固定化酶的储藏稳定性,在室温下储藏30 d其酶活力仍能保持在80%以上。在重复使用性研究中发现,固定化酶在连续使用5次后仍具有40%以上的催化活性。该研究结果有助于提高脂肪酶在工业生产中的适用性,并为其在生物柴油合成、洗涤剂及高温生产环境等多方面领域的应用奠定基础。
- 刘振山时祎陈剑雄辛瑜辛瑜张梁
- 关键词：脂肪酶固定化催化活性稳定性
- 乙酸钙不动杆菌磷脂酶C在大肠杆菌中重组表达、纯化及酶学性质分析被引量：3
- 2014年
- 【目的】构建乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)ATCC17902磷脂酶C(Phospholipase C,PLC)的重组大肠杆菌菌株、纯化重组酶并进行酶学性质分析比较。【方法】以A.calcoaceticus ATCC17902基因组DNA为模板,PCR扩增得到两段磷脂酶C基因(PLC1、PLC2),构建重组大肠杆菌表达质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,实现PLC1、PLC2基因的表达。IPTG诱导表达后,经镍柱亲和层析纯化重组蛋白。【结果】成功构建两株产磷脂酶C的重组大肠杆菌并纯化,样品经SDS-PAGE分析在80 kDa附近均出现显著的特异性条带。NPPC法测得PLC1、PLC2酶活分别为31160±418 U/mg、13640±354 U/mg,最适反应温度分别为65、50℃,最适pH值分别为8、7.5。在低于30℃时,pH值7-8时,PLC1、PLC2重组酶较稳定,40℃处理30min,PLC1酶活稳定而PLC2残余酶活低于25%。Mg2+、Ca2+增强PLC1、PLC2的活性,Zn2+增强PLC1酶活性却抑制PLC2酶活。底物特异性分析表明PLC1、PLC2均水解磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI),对其他种类磷脂不能水解或水解程度很低。【结论】本文首次实现了A.calcoaceticus ATCC17902来源的磷脂酶C的重组表达与功能验证,为其它食品安全性微生物来源的磷脂酶C的研究提供了一定的借鉴意义。
- 汪艳红张梁顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：磷脂酶C纯化
- 液化沙雷氏菌磷脂酶A1的克隆表达及乳糖自诱导发酵被引量：2
- 2013年
- 为了利用大肠杆菌高效生产重组磷脂酶,克隆了液化沙雷氏菌磷脂酶A1的编码基因pla,分别使用pET-28a(+)和pET-20b(+)载体,实现了磷脂酶A1在大肠杆菌BL21(DE3)中的功能表达。重组菌利用载体pET-28a(+)在原始信号肽的介导下胞外PLA1酶活达40.8 U/mL,占总酶活的91%。重组菌转接至优化后的发酵诱导培养基:蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,葡萄糖0.8 g/L,乳糖5 g/L,25 mmol/L Na2HPO4,25 mmol/L KH2PO4和1 mmol/L MgSO4;菌体生长6 h后,添加7.5 g/L的甘氨酸,37℃恒温发酵24 h,重组菌胞外PLA1酶活达到128.7 U/mL。
- 延晋雷张梁顾正华丁重阳石贵阳
- 关键词：磷脂酶A1分泌表达
- 重组大肠杆菌分泌表达鼠源羧肽酶B及其培养基优化被引量：1
- 2020年
- 为了简化纯化步骤,节约生产成本,笔者构建了能够胞外分泌鼠羧肽酶原B(proCPB)的重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-OmpA-proCPB,并进行发酵优化。结果表明:在信号肽OmpA的引导下,proCPB成功分泌至胞外,激活后的羧肽酶B(carboxypeptidase B,CPB)比酶活为131.22 U/mg。通过单因素及正交试验对发酵工艺进行优化,得出最佳培养基组合为甘油7 g/L、复合氮源15 g/L、MgSO_44 mmol/L、山梨醇0.3 mol/L、NaCl 10 g/L;最佳发酵条件为诱导温度30℃,诱导时间24 h。优化后,胞外proCPB的相对表达量为6.35(优化前的相对表达量为1)。首次实现了鼠羧肽酶原B在大肠杆菌中的胞外分泌表达,为羧肽酶B的工业化直接应用提供了一定的技术支持。
- 於瑞梅辛瑜顾正华顾正华李由然丁重阳李由然张梁
- 关键词：羧肽酶B分泌表达大肠杆菌发酵优化
- 玉米粉对灵芝菌体形态及胞外多糖的影响被引量：12
- 2017年
- 研究了灵芝液体深层发酵中,玉米粉对灵芝菌体形态和胞外多糖产量、相对分子质量、单糖组成的影响。发酵过程中随着玉米粉质量分数增加,灵芝菌球直径逐渐减小,中小型(S型和M型)菌球利于灵芝多糖生产;对不同质量分数玉米粉发酵获得的多糖相对分子质量及单糖组成比较,结果显示,玉米粉对灵芝多糖的相对分子质量没有影响,但对灵芝多糖的单糖组成及其比例有很大影响,添加玉米粉发酵获得的灵芝多糖中含有阿拉伯糖和木糖,但是岩藻糖和甘露糖的比例相对减少。
- 杨静静丁重阳顾正华张梁石贵阳
- 关键词：灵芝胞外多糖玉米粉菌体形态
- 阿魏蘑液体发酵过程菌体形态变化对产漆酶的影响被引量：2
- 2013年
- 本文旨在研究阿魏蘑菌体形态与漆酶产量之间的关系。结果显示，玻璃珠的添加可改变发酵过程中菌体形态，漆酶产量在球状菌体条件下高于丝状、絮状菌丝：直径分布在0．2～0．4mm范围的菌球对漆酶的合成具有明显的促进作用；适合的葡萄糖、玉米粉和麸皮添加量，对直径在0．2～0．4mm范围的菌球形成具有重要影响。此外，添加惰性载体同样可以控制菌球的直径分布，但对漆酶的合成无促进作用。
- 陈友枝王璐彭林丁重阳张梁顾正华石贵阳章克昌
- 关键词：阿魏蘑漆酶液体发酵
- 阿魏菇与胶红酵母共培养产漆酶对活性艳蓝W-RV的脱色被引量：2
- 2015年
- 利用阿魏菇与胶红酵母共培养所产漆酶对染料活性艳蓝W-RV进行脱色,同时考察不同p H、温度、染料浓度和漆酶酶活等条件对脱色的影响。结果显示,酸性范围内的p H有利于活性艳蓝W-RV的脱色,较高温度并不适于脱色反应。在研究不同染料浓度的影响时发现,不同浓度染料的脱色率在7 h反应后都达到了稳定,而漆酶酶活在达到200 U/L后脱色率不再变化。因此,最终得到的最适反应条件为p H 4.5、30℃、染料质量浓度100 mg/L、漆酶酶活200 U/L,在此条件下,活性艳蓝W-RV的最高脱色率为89.91%。
- 王寒彭林丁重阳顾正华张梁石贵阳
- 关键词：漆酶阿魏菇脱色
- 猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应物质的分离及分析被引量：1
- 2015年
- 以体外非酶糖基化反应抑制率为考察指标,对猴头菌发酵液中抑制非酶糖基化反应的高活性物质进行分离并纯化,通过发酵液浓缩、二步醇沉、提取物冷冻干燥、C18层析柱等步骤进行分离,获得1种对非酶糖基化反应具有良好抑制作用的物质组分HE35,经液相色谱-质谱(LC-MS)分析后发现,HE35的相对分子质量为294,2mg/m L的HE35对体外非酶糖基化抑制率达到92.17%,半抑制质量浓度IC50为0.65 mg/m L。初步分析猴头菌发酵液中可能存在一种以上的活性物质,对体外非酶糖基化反应具有抑制作用。
- 田超陶冠军丁重阳顾正华张梁石贵阳
- 关键词：猴头菌非酶糖基化液态发酵抑制率
