郝建忠
- 作品数：18 被引量：23H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金潍坊市科技局资助课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人牙成釉细胞相关蛋白启动子的克隆和转录活性分析被引量：1
- 2010年
- 目的:构建人牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因载体,比较不同的启动子片段在成釉细胞、Hela细胞中的活性,为进一步判定上游启动子的转录调控区奠定基础。方法:以PCR方法获取基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染成釉细胞及Hela细胞,通过检测荧光素酶活性来分析启动子区域的转录调控能力。结果:成功地获得了不同长度的ODAM基因启动子目的片段,酶切鉴定表明不同长度启动子荧光素酶报告基因载体构建成功,不同长度的启动子在不同的细胞中活性不同,-333～-195与-195～-96区域为特异的转录调控作用区。结论:初步确定了ODAM基因启动子的转录活性区,为进一步研究该基因转录调控特点奠定基础。
- 韩婷婷刘晓影郝建忠高玉光
- 关键词：启动子成釉细胞
- 转录因子c-fos/c-jun调控成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的表达
- 2015年
- 背景:基质金属蛋白酶20是在成釉细胞中特异性表达的一种蛋白酶,其在牙齿釉质发育过程中具有重要作用。从分子角度研究基质金属蛋白酶20可受到的调控机制,为进一步做动物实验奠定基础。目的:通过研究转录因子c-fos/c-jun对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的调控作用,初步确定c-fos/c-jun在牙釉质发育中的作用。方法:首先构建c-fos真核表达载体重组质粒,分别利用双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析c-jun、c-fos转染成釉细胞对基质金属蛋白酶20基因活性的影响;并利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统进一步分析c-jun、c-fos对基质金属蛋白酶20基因活性的影响。结果与结论:双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析显示c-jun、c-fos转染转染小鼠成釉细胞后,基质金属蛋白酶20基因表达显著上调;突变基质金属蛋白酶20启动子的AP1结合位点后,c-fos/c-jun失去上调基质金属蛋白酶20启动子的转录活性的作用。结果提示c-fos/c-jun对基质金属蛋白酶20基因表达具有重要的调节作用,表明其在釉质发育过程中有其重要的生物学意义。
- 唐培娟王长磊宫春梅唐培倩郝建忠
- 关键词：骨组织工程实时定量RT-PCR
- 富血小板血浆在自体骨修复山羊颅骨缺损中的作用被引量：1
- 2011年
- 目的 观察富血小板血浆（PRP）在自体骨修复山羊颅骨缺损中的作用,验证自体骨与富血小板血浆混合物的修复效果.方法 制作山羊颅骨缺损模型,设空白对照组,分别用自体骨渣、自体骨渣与富血小板血浆混合物修复颅骨缺损,12周后行病理学检查,16周后行生物力学检查.结果 颅骨修复后12周的标本组织学检查示实验组成骨较对照组有明显增加.自体骨/PRP组缺损完全修复.生物力学测试最大载荷、最大负荷对应挠度实验组与对照组无显著差异.自身最大载荷比有显著性差异（P=0.015）.结论 PRP对骨形成有促进作用,PRP/自体骨渣混合物是一种优良的骨缺损修复材料.
- 卢小生吴正华郝建忠季中蕾刘媛媛杨玉昌
- 关键词：富血小板血浆自体骨颅骨缺损生物力学
- TGF-β1调控成釉细胞ODAM基因表达的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨TGF-β1对ODAM基因表达的作用。方法:通过实时定量RT-PCR法观察TGF-β1对成釉细胞ODAM基因表达的影响;利用c-jun小RNA干扰(siRNA)技术,阻断转录因子c-jun基因表达,观察c-jun基因沉默对TGF-β1诱导ODAM基因表达的影响;利用双荧光素酶基因报告系统研究成釉细胞中TGF-β1对ODAM启动子转录活性的调控作用。结果:TGF-β1刺激成釉细胞后,ODAM基因表达显著增强;利用小RNA干扰技术使c-jun基因沉默,实时定量RT-PCR法研究显示,TGF-β1调控ODAM基因表达的作用减弱。将pGL3-ODAM转染成釉细胞后,用TGF-β1刺激成釉细胞一定时间,ODAM启动子的转录活性增强。c-jun基因沉默抑制了TGF-β1对ODAM启动子的激活作用。结论:在釉质发育过程中,TGF-β1通过转录因子c-jun调控成釉细胞ODAM基因表达。
- 郝建忠孙学玲何永云梁广智刘晓影孙岩高玉光
- 转录因子Runx2调控前成骨细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达被引量：2
- 2015年
- 背景:细胞外基质磷酸化糖蛋白基因在骨的矿化和吸收、成骨细胞与破骨细胞的平衡中起重要的作用,研究细胞外基质磷酸化糖蛋白的功能及其调控机制可为骨质疏松症的治疗提供新的思路。目的:分析转录因子Runx2在小鼠前成骨细胞中对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的调控作用,进而初步研究转录因子Runx2在骨形成发育过程中的作用。方法:首先根据Genbank中Runx2的基因序列构建Runx2真核表达载体;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析Runx2对不同长度的细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响,以确定Runx2有明显作用的启动子区段,分析3种MAPK信号通路抑制剂调控Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响;最后利用定时定量RT-PCR法分析Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子表达活性的影响。结果与结论:成功构建Runx2真核表达载体;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示Runx2能够上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,在(-300-+66)366 bp片段区域内上调效果较为显著,Runx2可通过激活MEK激酶MAPK通路上调细胞外基质磷酸化糖蛋白启动子活性;定时定量RT-PCR法检测再次验证Runx2上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达水平。提示转录因子Runx2可以通过MEK激酶MAPK信号通路对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因表达进行调节,为探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白在骨形成发育过程中的意义奠定基础。
- 孙玉娇宫春梅郝建忠孙岩刘晓影
- 关键词：骨细胞RUNX2
- 釉成熟蛋白真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确。将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况。结果:成功克隆了Amelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达。结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础。
- 魏亚红郝建忠孙岩高玉光官秀梅
- CGRP影响人牙髓干细胞增殖分化的研究
- 2017年
- 目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)对人牙髓干细胞增殖分化的调控作用,并初步探讨CGRP的调控信号通路。方法首先获取健康的牙髓,体外培养并筛选牙髓干细胞;采用MTT法检测不同浓度的CGRP对牙髓干细胞的增殖作用,获取适宜的作用浓度;利用茜素红染色法观察CGRP作用下牙髓干细胞形成矿化结节的效果;在实时定量RT-PCR法及免疫印迹法检测CGRP作用下牙髓干细胞中Ⅰ型胶原(Col-1)、转录因子Runx2的mRNA和蛋白表达水平;最后利用实时定量RT-PCR法检测MAPK信号通路抑制剂作用下CGRP对牙髓干细胞中Ⅰ型胶原、Runx2 mRNA表达水平的影响。结果经过筛选培养获得生长稳定的牙髓干细胞;MTT法检测可知CGRP可促进牙髓干细胞的增殖,在CGRP的浓度达到10^(-7)mol/L时效果最显著;在CGRP作用牙髓干细胞28 d后,经茜素红染色可见矿化结节;经实时定量RT-PCR法和免疫印迹法检测可知CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1、Runx2的mRNA和蛋白表达水平得到显著提高;MAPK信号通路中ERK激酶通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Runx2表达的水平,ERK激酶和p38通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1表达的水平。结论 CGRP能够促进牙髓干细胞的增殖分化,这一作用受到MAPK信号通路的调控。
- 刘航郝建忠栾可峰李哲于天资张继萍
- 关键词：降钙素基因相关肽牙髓干细胞分化MAPK信号通路
- 太极扣附着体修复牙周病合并游离端缺失的应用被引量：1
- 2007年
- 目的评价太极扣附着体修复牙周病合并游离端缺失的临床应用价值。方法165例牙周病合并游离端缺失的患者，随机分为2组，实验组86例，用太极扣附着体修复，对照组79例，为常规卡环式可摘义齿修复，比较2组的临床效果满意率。结果经1-3年临床观察，2组比较有显著性差异（P〈0．01），结论太极扣附着体义齿修复牙周病合并游离端缺失优于卡环式可摘义齿，解决了患者因牙周病不能修复的问题.
- 谷德岩韩超英郝建忠李瑞智李德仁
- 关键词：太极扣附着体牙周病游离端缺失卡环
- Lava Ultimate优韧瓷髓腔固位冠在大面积牙体缺损短冠磨牙修复中的应用观察被引量：7
- 2022年
- 目的观察Lava Ultimate优韧瓷髓腔固位冠在大面积牙体缺损短冠磨牙修复中应用效果。方法大面积牙体缺损短冠磨牙85颗,分为Lava Ultimate优韧瓷髓腔固位冠组(优韧瓷组)40颗、氧化锆髓腔固位冠组(氧化锆组)45颗,分别采用Lava Ultimate优韧瓷、氧化锆髓腔固位冠修复。修复后12个月对两组髓腔固位冠修复体进行临床效果评价,包括修复体完整性、修复体松动及脱落、边缘适合性、边缘着色、继发龋和牙龈健康状况,计算临床成功率。修复后12个月进行满意度调查,包括修复体颜色、外形、咀嚼功能和舒适度4个方面。离体短冠恒磨牙20颗,制作Lava Ultimate优韧瓷以及氧化锆髓腔固位冠修复体各10个,分别记为LU组、ZrO2组,制作硅橡胶间隙印模后,观察修复体边缘适应性(M1点值)和内部适应性(M2、M3及M4点值)。结果优韧瓷组和氧化锆组的髓腔固位冠修复体边缘密合,无边缘着色及继发龋的发生。优韧瓷组在修复后12个月出现1例修复体咬合面破损、1例牙龈轻微炎症,临床成功率为95.0%;氧化锆组在修复后12个月时出现1例修复体脱落、2例牙龈轻微炎症,临床成功率为93.3%,两组临床成功率相比,P>0.05。优韧瓷组患者在修复体舒适度的满意率高于氧化锆组(P<0.05)。LU组M1、M2、M3、M4点间隙值均小于ZrO2组(P均<0.05)。结论与氧化锆相比,Lava Ultimate优韧瓷髓腔固位冠修复大面积牙体缺损短冠磨牙疗效相当,但患者舒适度更高,且Lava Ultimate优韧瓷髓腔固位冠修复体的边缘适应性和内部适应性均更优。
- 鲁铭祺范欣郝建忠王长磊
- 关键词：短冠磨牙牙体缺损
- Tet-on Advanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立
- 2009年
- 目的应用Tet-on Advanced基因表达系统构建由强力霉素(Dox)诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。方法通过RT-PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,利用Tet-on Advanced基因表达系统先后将调控质粒pTet-on Advanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选,克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系。用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达。结果连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-on Advanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可以使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加。结论成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础。
- 李东亮郝建忠孙岩李武修高玉光
- 关键词：TET-ONADVANCEDRT-PCR
