饶燕玲
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默DNA甲基转移酶1基因对子宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2009年
- 目的利用RNA干扰技术沉默宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基转移酶（DNMT）1基因的表达，探讨沉默DNMT1基因后对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法针对DNMT1基因构建短发夹状RNA（shRNA）重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒，并行酶切鉴定和测序分析。采用RT-PCR技术筛选出其中RNA干扰效果最佳的重组载体，通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞（转染组），以空载体组（转染空载体pSilencer3．1-H1质粒）和未转染组（未作任何处理）为对照。采用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测转染前后HeLa细胞中DNMT1mRNA和蛋白表达的变化，活细胞计数（CCK-8）法和双染法流式细胞术分别检测转染前后HeLa细胞增殖和凋亡的变化。结果（1）酶切鉴定和测序分析证实，靶向DNMT1的3个shRNA重组载体pshRNA-DNMT1．A、B和C质粒构建成功。RT-PCR技术筛选显示，重组载体pshRNA-DNMT1-B质粒的干扰效果最佳。（2）RT-PCR技术检测显示，转染组转染24、48及72h时HeLa细胞中DNMT1mRNA的相对表达水平分别为0．406±0．057、0．191±0．036、0．104±0．015，明显低于空载体组和未转染组（分别为0．520±0．020、0．537±0．041，P〈0．05）。蛋白印迹法检测显示，转染组转染24、48及72h时细胞中DNMTl蛋白的相对表达水平分别为0．197±0．024、0．075±0．015、0．040±0．013，明显低于空载体组和未转染组（分别为0．273±0．010、0．283±0．016，P〈0．05）。（3）CCK-8法检测显示，转染组转染24、48、72、96、120h时HeLa细胞存活率分别为70．8％、64．8％、51．6％、45．3％、38．0％，分别与空载体组和未转染组各时间点比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。双染法流式细胞术检测显示，转染组转染24、48及72h时的细胞凋亡率分别为（17．7±1．3）％、（35．3±1．3）％、（47．6±1．6）％，明显高于空载体组及未转染组[分别为（4．9±0．5）％、�
- 赵先兰饶燕玲乔玉环张会利
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞RNA干扰细胞增殖
- 宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1mRNA的表达被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在宫颈癌发生发展中的作用。方法:应用原位杂交技术检测52例宫颈癌、60例宫颈上皮内瘤变和20例正常宫颈组织DNMT1 mRNA的表达;分析DNMT1 mRNA的表达和宫颈癌患者临床病理指标的关系。结果:正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的阳性率分别为10.0%(2/20)、63.3%(38/60)和78.8%(41/52),呈升高趋势(χ2=29.057,P<0.05),宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织DNMT1 mRNA的阳性率高于正常组织。不同宫颈癌的病理类型、临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移组间DNMT1 mRNA阳性率差异无统计学意义。结论:DNMT1参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了重要作用。
- 赵先兰饶燕玲孟志英乔玉环
- 关键词：宫颈肿瘤宫颈上皮内瘤变DNA甲基转移酶1
- 靶向DNA甲基转移酶1的siRNA表达载体的构建与筛选被引量：1
- 2010年
- 目的:构建针对DNA甲基转移酶(dnmt1)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,以用于后续的RNA干扰研究。方法:针对人dnmt1的mRNA序列,设计并合成6条编码siRNA的寡核苷酸片段,经退火成互补双链,克隆至载体pSilencer3.1-H1中构建3个重组体,分别命名为pshRNA-dnmt1-A、pshRNA-dnmt1-B和pshRNA-dnmt1-C,并进行测序鉴定。再利用无内毒素的大提质粒试剂盒制备无内毒素的pshRNA-dnmt1-A、B和C,分别通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞,以未转染和转染空载体者为对照。采用RT-PCR和Western blot检测转染细胞dnmt1 mRNA及蛋白表达情况。结果:成功构建了表达靶向dnmt1的siRNA重组载体;转染pshRNA-dnmt1-C对HeLa细胞dnmt1基因的表达几乎无影响。pshRNA-dnmt1-A、B均能有效沉默HeLa细胞中dn-mt1基因的表达,其dnmt1mRNA表达的抑制率分别为21.8%和69.7%,蛋白表达的抑制率分别为27.9%和73.2%,以pshRNA-dnmt1-B的干扰效果最佳。结论:成功构建并筛选出了有效的dnmt1siRNA表达载体。
- 赵先兰孟志英饶燕玲孙亚兰姜国忠刘红涛
- 关键词：DNA甲基转移酶1RNA干扰HELA细胞
- 子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA表达和E-cad甲基化检测被引量：6
- 2009年
- 目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cadherin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析宫颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性。结果:DNMT1 mRNA在正常宫颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05)。结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。
- 赵先兰张会利饶燕玲
- 关键词：宫颈鳞状细胞癌上皮钙粘附素甲基化甲基化特异性PCR
- DAPK和DNMT1在宫颈癌中的相关性研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨宫颈癌中DAPK(Death-associated protein kinase)启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达及两者之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例CIN(cervical intraepithelial neoplasia)和20例正常宫颈组织中DAPK启动子甲基化状况;应用原位杂交方法检测DNMT1 mRNA的表达。结果正常宫颈鳞状上皮不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而在CIN和宫颈癌中的甲基化率分别为18.3%(11/60)、65.4%(34/52),差异有统计学意义(χ2=39.639,P<0.001)。正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈癌DNMT1 mRNA阳性率分别为10%、63.3%和78.8%,差异有统计学意义(χ2=29.057,P<0.001)。DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA表达成正相关,r=0.308,P<0.001。结论DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA过表达参与了宫颈癌的发生;DAPK基因启动子的甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。
- 赵先兰孟志英乔玉环张会利饶燕玲
- 关键词：宫颈癌抑癌基因甲基化DAPKDNMT1
