鞠玉亮
- 作品数：3 被引量：33H指数：3
- 供职机构：南京农业大学植物保护学院农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 基于线粒体DNA-COI序列的禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫双重PCR检测被引量：6
- 2016年
- 【目的】设计禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)和菲利普孢囊线虫(Heterodera filipjevi)特异性引物,建立同步快速检测这两种线虫的双重PCR体系,为中国小麦孢囊线虫(cereal cyst nematodes,CCN)的田间快速诊断与综合治理提供技术支持。【方法】通过比对分析10种植物寄生线虫24个群体的线粒体DNA(mtDNA)COI序列,分别设计并筛选禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的上游特异性引物Ha F8和Hf F9,以及下游通用引物Haf R8;通过引物浓度比和退火温度的优化,建立针对这两种CCN的双重PCR检测体系;利用该体系对中国黄淮麦区部分CCN样品进行种类鉴定。【结果】筛选并获得的特异性引物Ha F8/Haf R8及Hf F9/Haf R8,可在一步PCR反应中实现对禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的特异性检测。引物Ha F8/Haf R8对禾谷孢囊线虫的特异性扩增产物为200 bp,而Hf F9/Haf R8对菲利普孢囊线虫的特异性扩增产物为320 bp,条带区分较明显。对双重PCR检测体系的优化发现,引物Ha F8、Hf F9、Haf R8的退火温度为58℃时,该检测体系具有较高的特异性和扩增效率;引物Ha F8﹕Hf F9﹕Haf R8浓度比为0.24﹕0.16﹕0.4μmol·L-1时,该检测体系能从不同供试线虫中同时特异性地检测出禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫,且扩增效率较高。该检测体系对禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫单孢囊的检测灵敏度为1/2 000 000个孢囊,而对2龄幼虫的检测灵敏度则分别为1/640条线虫和1/1 280条线虫。对采集自中国黄淮麦区CCN病田的14份土样进行双重PCR检测,发现有8个样本只扩增出200 bp的条带,表明这些样本的CCN种类为禾谷孢囊线虫,有4个样本只扩增出320 bp的条带,表明CCN种类为菲利普孢囊线虫,2个样本同时扩增出200和320 bp两个条带,表明样品为禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫的混合发生。以上结果表明,该检测体系可以成功用于两种小麦孢囊线虫田间复合侵染情�
- 牛雯雯王暄李红梅鞠玉亮万文文
- 关键词：禾谷孢囊线虫双重PCRCOI特异性
- 土壤中南方根结线虫的实时荧光PCR检测和定量被引量：22
- 2013年
- 为了准确测定土壤中南方根结线虫Meloidogyne incognita的群体密度,根据序列特异性扩增区标记设计了南方根结线虫特异性引物和TaqMan探针,分别建立了卵和2龄幼虫的实时荧光PCR定量检测体系,并将该检测体系与显微镜计数法进行了比较。结果表明,引物Mi-F/R及探针Mi-probe对南方根结线虫具有高度特异性,建立的标准曲线循环阈值与卵和2龄幼虫数量的对数值之间具有良好的线性关系,相关系数分别为0.9771和0.9853,扩增效率均为90%,检测灵敏度为10-1个卵及10-3条2龄幼虫;对10个田间土壤样本的检测显示,实时荧光PCR定量检测与显微镜计数法测定的南方根结线虫卵和2龄幼虫数量呈显著正相关,且两种方法对2龄幼虫的测定结果无显著差异。
- 宋志强王暄林宇迟元凯鞠玉亮李红梅
- 关键词：南方根结线虫实时荧光PCRTAQMAN探针
- 基于GenBank分析28S(D2/D3)、18S和ITS序列作为根结线虫条形码标记的适用性被引量：8
- 2013年
- 基于GenBank中根结线虫属的核酸序列,筛选了28S(D2/D3)、18S和ITS 3个不同的序列片段,利用遗传距离法和分子系统学方法评价其各自作为根结线虫条形码标记的可行性。结果显示:28S(D2/D3)、18S及ITS的核酸序列种内平均遗传距离分别为0.004 3、0.002 7和0.024,种间平均遗传距离分别为0.074、0.036和0.156,由于属内近缘种的影响,各分子标记的种内、种间遗传距离均有一定的重叠;基于K2P模型构建的3种分子标记NJ系统发育树显示,南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫均混合聚类,难以区分;经统计,28S(D2/D3)、18S及ITS对根结线虫属内不同种的识别率分别为74%、60%和46%。研究表明:28S(D2/D3)具有一定的遗传距离间隔以及相对较高的物种识别率,可以作为根结线虫属候选条形码标记。
- 林宇王金成迟元凯鞠玉亮王暄李红梅
- 关键词：根结线虫属DNA条形码物种鉴定
