陈敬
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的重组表达及免疫保护作用研究被引量：6
- 2010年
- 目的研究不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）重组外膜蛋白P6的理化性质和对小鼠的免疫保护作用。方法利用PCR技术，以NTHi基因组为模板，扩增出编码外膜蛋白P6的基因片段；构建pET-32a—P6重组质粒；转化到大肠杆菌B121（DE3）中进行表达，并对表达条件进行了优化。通过阴离子交换和凝胶过滤层析对蛋白进行纯化。经SDS—PAGE、Western blot等对蛋白的理化性质进行初步分析，继而免疫BALB／c小鼠，用同源菌经腹腔攻击，比较免疫组和对照组小鼠死亡率。结果实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达，产物表达形式为可溶性表达，纯化后蛋白纯度可达95％，收率可达5mg／g（蛋白／湿菌），相对分子质量（Mr）为14145．848，Western blot证实重组P6蛋白能与菌源提纯P6蛋白免疫小鼠后的抗血清发生特异性反应。动物实验结果表明重组P6蛋白在小鼠体内能诱生高滴度的抗体，显示免疫组小鼠存活率明显高于对照组（P〈0．01）。结论重组NTHi外膜蛋白P6的原核表达产物为可溶性蛋白，在小鼠体内能诱生高效价抗体，在小鼠感染模型中具有保护作用，为NTHi疫苗的研发提供了基础资料。
- 陈祥鹏王健李莉莉陈敬张振龙
- 关键词：不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白克隆表达免疫保护
- 制备疫苗用W135/Y群脑膜炎球菌菌种的免疫原性及遗传稳定性观察
- 2010年
- 目的 为保证生产四价流脑（A、C、W135、Y群）结合疫苗质量一致性和可控性,对分离自国内的W135、Y群脑膜炎球菌CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株进行免疫原性及遗传稳定性观察.方法 将W135/Y群脑膜炎球菌工作种子批菌种分别连续传代至30代,并收获3、5、10、15、20、25及30代次菌液,对各代次菌进行免疫原性、抗原性、生化反应、毒性、毒力测定,并将30代次菌发酵培养后提取荚膜多糖进行质量分析.结果 CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株工作种子批菌种诱导小鼠产生总IgG抗体分别为1∶1114和1∶2229,杀菌抗体水平与IgG抗体间差异无统计学意义;试管凝集效价均达到1∶320,生化检定两菌株均发酵葡萄糖、麦芽糖,不发酵果糖、蔗糖、甘露醇和乳糖;两菌株的LD50均＞109,30代次内各代次菌的免疫原性、抗原性、生化反应和毒性均无差异.30代次菌液脑腔毒性测定显示均无病理改变,用第30代次菌生产的W135/Y群脑膜炎球菌荚膜多糖各项检定指标均合格.结论 分离自国内的CMCC（B）29037株和CMCC（B）29028株为脑膜炎球菌W135/Y群菌株,免疫原性、抗原性好,生化反应合格、安全性良好,连续传至30代次仍保持较好的安全性和免疫原性,30代次菌纯化的W135/Y群脑膜炎球菌荚膜多糖质量符合质控要求,可以用作四价流脑结合疫苗生产株.
- 刘钰刘梅影王义萍陈敬张燕斌王平王雪薇林海涛焦小玲李冶珊焦梦
- 关键词：血清学试验生化反应荚膜多糖
- Y群脑膜炎球菌多糖活化工艺的优化被引量：3
- 2010年
- 目的优化Y群脑膜炎球菌多糖活化工艺,为A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗的研制奠定基础。方法分别以多糖衍化率和游离多糖含量为指标,按照三因素三水平正交试验,以不同的pH值、活化时间和活化剂加量对多糖进行活化后,与破伤风类毒素(TT)偶联,并经Sepharose4FF层析纯化后,对多糖-TT结合物进行各项生化检定、免疫原性检测及稳定性观察,确定最佳活化工艺,并对优化的工艺进行验证。结果以多糖衍化率为指标,可确定pH值和活化剂加量二因素对Y群脑膜炎球菌多糖的活化有显著影响(P<0.05),而以游离多糖为指标时,无法确定三因素对多糖的活化有显著影响(P>0.05),结合各项指标检测及稳定性观察结果 ,确定多糖活化最佳工艺为:在pH12条件下,向每mg多糖中加入等量活化剂,反应10min。采用优化的多糖活化工艺制备3批Y群脑膜炎球菌多糖-TT结合物,各项指标均符合多糖结合疫苗的常规质控标准。结论优化的多糖活化工艺可制备出游离多糖含量低、免疫原性高的Y群脑膜炎球菌多糖蛋白结合物,结果具有重复性。
- 刘梅影陈敬刘钰李冶珊林海涛张燕斌王平王雪薇焦小玲王义萍
- 关键词：活化免疫原性
- 不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的纯化及其免疫原性被引量：4
- 2010年
- 目的纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)外膜蛋白P6,并检测其免疫原性。方法常规培养NTHi,根据外膜蛋白P6的特性纯化P6蛋白。Lowry法测定纯化P6蛋白的含量;SDS-PAGE检测纯化P6蛋白的相对分子质量及纯度;IEF-PAGE分析纯化P6蛋白的等电点;琼脂糖双向免疫扩散试验鉴定纯化P6蛋白;以纯化的P6蛋白免疫NIH小鼠,ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平,并进行小鼠保护性试验。结果纯化的P6蛋白含量为208μg/ml;相对分子质量为16600,纯度为100%;等电点为5.49;琼脂糖双向免疫扩散试验证实所提取的蛋白为P6蛋白;ELISA检测显示,P6蛋白具有良好的免疫原性,免疫小鼠后能够诱导产生针对P6蛋白的抗体,其抗体水平呈剂量依赖关系,最佳免疫剂量为10μg/只,最佳免疫针次为3针;对20LD50NTHiSSIp/1225株攻击的小鼠保护率为80%。结论已纯化了不可分型流感嗜血杆菌外膜蛋白P6,其具有良好的免疫原性和保护效果。
- 陈敬王建华
- 关键词：细菌外膜蛋白质类免疫
