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孕妇CD36抗原表达筛查及基因测序分析被引量：1: 2018年; 目的了解孕妇CD36抗原的表达及其基因型。方法对在本中心做抗体筛查及血小板抗体检测的200名孕妇,采用流式细胞术检测其血小板及单核细胞上的CD36表达,并对其中血小板或单核细胞上CD36抗原缺失者做基因测序分析。结果本组孕妇CD36缺失表达率为1.5%（3/200）,3例CD36缺失均为Ⅱ型缺失（只有血小板上CD36缺失）,未见CD36Ⅰ型缺失（血小板和单核细胞上CD36都缺失）。3例CD36缺失表达者基因测序分析：2例发生CD36基因突变,其突变位点分别是Exon12 A1163T和Exon5 329-330del AC,为常见的基因突变类型;1例为正常CD36基因型。结论孕妇CD36表达缺失率与中国普通人群相似,缺失者CD36基因发生了基因突变。; 邵媛徐秀章丁浩强刘静王嘉励夏文杰邓晶陈大伟陈扬凯叶欣; 关键词：CD36 抗原表达基因突变孕妇流式细胞术

机采血小板与白膜法手工血小板质量差异分析: 2024年; 目的分析机采血小板和白膜法手工血小板在储存期内的质量差异。方法随机选取相同储存期内机采血小板和白膜法手工血小板各20袋,对所有标本进行常规质量控制评估。分别在储存期的第1天、第3天和第5天,对血小板的形态学计分、血小板分布宽度(PDW)、平均血小板体积(MPV)、CD62P阳性率、血栓弹力图参数(包括MA值、R时间、K时间和α角度)进行测定。结果所有标本的常规质量控制指标均符合质量要求。在储存期第1天和第3天,2种血小板的形态学计分、CD62P阳性率和MPV差异均无统计学意义(P均>0.05)。与储存期第1天的CD62P阳性率相比,储存期第3天和第5天的机采血小板和手工血小板均显著升高,差异均有统计学意义(F=91.07、82.57,P均<0.05)。与储存期第1天相比,储存期第3天和第5天的机采血小板和手工血小板细胞形态学计分均显著下降,差异均有统计学意义(F=107.20、97.05,P均<0.05)。结论机采血小板与白膜法手工血小板的质量无明显差异,临床上可科学合理使用,但2种血小板均会发生储存损伤,建议临床上最好在3 d内输注。; 欧代校陈大伟何博曾繁浪刘辉忠陈晓文李玉笑; 关键词：机采血小板储存期

一种鼠源性抗鼠CD36单克隆抗体的制备方法: 本发明涉及一种鼠源性抗鼠CD36单克隆抗体的制备方法，属于基因工程技术领域；具体包括CD36基因敲除小鼠基因型鉴定、血小板cDNA的PCR扩增、TA克隆及蓝白斑筛选、细胞转染及G418筛选、流式鉴定、Western Bl...; 徐秀章陈大伟叶欣夏文杰付涌水; 文献传递

广州地区伊朗献血人群CD36表型筛查及基因型鉴定被引量：2: 2017年; 目的了解广州地区伊朗籍献血者CD36表型及基因型。方法对2016年在广州血液中心捐献机采血小板的53例伊朗人献血者标本,应用流式细胞仪分别检测血小板和单核细胞上CD36抗原的表达。对CD36抗原表达异常者提取DNA,采用PCR-SBT测序做CD36的基因型鉴定并做基因突变分析。结果本组伊朗人群的CD36抗原表达异常率7.55%(4/53),其中2例的CD36抗原在血小板上表达含量低,1例为血小板和单核细胞上均无表达(即CD36Ⅰ型缺失),1例为单核细胞上CD36表达量低,由此得出CD36缺失表达的频率为1.89%(1/53)。PCRSBT法分析:CD36抗原表达异常4例的CD36基因型中,血小板上低表达CD36抗原的2例发生基因突变,分别是exon 10-975T/G和exon11 del CTA,且均为新的基因突变;2例CD36基因型正常。结论本组伊朗献血人群里CD36抗原表达异常者中存在新的基因突变,其对CD36抗原表达的影响尚需进一步认证。; 王嘉励刘静丁浩强徐秀章邓晶邵媛陈扬凯夏文杰陈大伟叶欣; 关键词：伊朗人

人ITGB3基因c.598G/A突变体外表达分析及其与新生儿同种免疫性血小板减少症发生的关系探讨: 2025年; 目的通过ITGB3基因c.598G>A突变体外表达,探讨其是否参与了胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia,FNAIT)的发生。方法运用商品化酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、固相凝集法、流式细胞术以及金标准单克隆抗体特异性捕获血小板抗原技术(monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens,MAIPA)检测患儿及其母亲血清中存在的血小板抗体。采用HPA-SSP法获得患儿及其父母的常见血小板抗原(human platelet antigens,HPAs)基因型。通过ITGB3和ITGA2B基因外显子测序分析是否存在基因突变。利用已有的人血小板cDNA进行PCR扩增,获取ITGB3目的基因,并借助TA克隆技术构建野生型ITGB3真核表达载体,点突变获得598G>A突变型ITGB3真核表达载体,与ITGA2B(αⅡb)的质粒DNA共转染HEK293细胞,筛选获得稳定表达GPⅡb/Ⅲa的转染细胞。通过流式和MAIPA检测598G>A突变型转染细胞的GPⅡb/Ⅲa表达情况以及母亲血清中是否存在针对该突变的抗体。结果患儿母亲血清中检出针对HLA-Ⅰ类和GPⅡb/Ⅲa糖蛋白的抗体,后续HLA抗体特异性检测证实存在针对HLA-B*57∶01和A*02∶05的抗体。ITGB3测序显示,患儿及其父亲携带c.598G>A点突变,可导致第200位谷氨酸变成赖氨酸。利用构建的c.598G>A突变转染细胞与母亲血清反应,未检出针对GPⅡb/Ⅲa糖蛋白的抗体。结论通过ITGB3基因c.598G>A突变体外表达及检测分析,否定了该突变参与的FNAIT发生,此方法的建立有利于发现新的血小板低频抗原,为不良孕产史患者相关血小板抗原抗体的检测奠定了理论基础。; 丁浩强叶欣徐秀章夏文杰邓晶刘静陈扬凯陈大伟许耀日; 关键词：体外表达

一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法被引量：5: 2012年; 目的建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法。方法取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50ml离心管,用Ⅰ型胶原酶、DNaseⅠ及蛋白酶等多种酶混合液消化20min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5min,将组织扣在培养皿中,转入15ml离心管,用10%人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定。结果选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95%以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12～18h形成官腔结构。结论本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型。; 王征齐炜炜陈少波戴智育陈大伟程锐高国全杨霞; 关键词：视网膜微血管内皮细胞细胞培养

广州地区无偿献血人群中HLA及HNA抗体筛查及特异性分析: 陈大伟徐秀章付涌水夏文杰叶欣邓晶丁浩强陈扬凯邢媛刘静王嘉励

鼠源性抗人CD36单克隆抗体131-G1（G2a）和176-B8（G1）: 本发明涉及鼠源性抗人CD36单克隆抗体131‑G1（G2a）和176‑B8（G1）的制备方法，属于基因工程技术领域；具体的单克隆抗体制备过程包括CD36基因敲除小鼠基因型鉴定、人血小板cDNA的PCR扩增、TA克隆及蓝白...; 陈大伟徐秀章夏文杰叶欣付涌水; 文献传递

广州地区209例HLA-Ⅰ类抗体引起的血小板输注无效患者抗体特异性及epitopes分析被引量：4: 2022年; 目的了解广州地区人类白细胞抗原(HLA)⁃Ⅰ类抗体所致血小板输注无效(PTR)患者的HLA抗体特异性及高频抗原决定簇。方法采用ELISA方法对209例PTR患者的HLA⁃Ⅰ类抗体进行检测。运用Luminex检测平台,通过HLA特异性抗体检测试剂盒(LIFECODES LSA^(TM)CLASS I)检测患者血清中针对HLA⁃A、B及Cw的特异性抗体;经MATCH IT!和HLA Matchmaker软件分析,获得患者HLA⁃Ⅰ类抗体特异性及相应epitopes。统计分析PTR患者血清中针对HLA⁃A、B、Cw位点的特异性抗体及epitopes的阳性频率。结果209份HLA⁃Ⅰ类抗体阳性PTR患者标本中共检出95种特异性抗体,其中针对HLA⁃A位点的抗体29种,以A*24:02(42.58%)最常见;检出针对HLA⁃B位点的抗体48种,阳性频率较高的有B*27:08(50.72%)、B*82:02(45.45%)、B*15:12(44.98%)、B*07:02(44.02%)、B*35:01(42.58%)、B*35:08(42.58%)和B*27:05(42.11%);针对血小板低表达Cw位点的抗体仅检出18种,常见C*07:01(19.62%)和C*07:02(18.66%)。运用HLA Matchmaker软件分析,共检出182种HLA⁃I类epitopes,以163 LG(19.28%)、71 KA(16.27%)、30 G(15.06%)、163 EW(11.45%)和127 K(11.45%)相对高频。结论获得广州地区PTR患者体内HLA⁃Ⅰ类抗体的分布特点,对血小板供者库的建立以及Eplet配型方法的开展提供理论依据。; 陈扬凯徐秀章叶欣邓晶丁浩强夏文杰邵媛刘静陈大伟许耀日; 关键词：血小板输注无效抗原决定簇

大规模体外扩增NK细胞的方法和应用: 本发明公开了大规模体外扩增NK细胞的方法和应用。一种大规模体外扩增NK细胞的方法，其中激活NK细胞的灭活病毒为腺病毒Ad5。本发明选定灭活病毒Ad5进行激活终末分化的NK细胞，这种灭活的腺病毒激活NK细胞的能力特别强，在...; 罗升学曾飞凤陈大伟何博夏文杰梁华钦

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陈大伟

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