王建新
- 作品数：6 被引量：9H指数：1
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 2022—2023年我国部分地区猪A群轮状病毒分子流行病学调查分析被引量：8
- 2023年
- 【目的】探究我国部分地区猪A群轮状病毒(RVA)的分子流行病学特征,明确当前的优势基因型,为RVA科学防控与疫苗研发提供理论依据。【方法】2022年1月—2023年3月收集江苏、江西、福建、山西和贵州5省36个规模化猪场送检的434份腹泻仔猪粪便样品,采用RT-PCR检测样品RVA阳性情况,对部分RVA阳性样品的VP7和VP4基因进行扩增及测序,与各型参考序列进行多序列比对,使用MegAlign进行核苷酸序列同源比对分析,并采用MEGA 7.0的邻接法构建系统发育进化树。【结果】RT-PCR检测结果显示,434份腹泻仔猪粪便样品中RVA阳性样品为196份,阳性检出率为45.16%。2022年与2023年初的阳性检出率分别为40.37%(132/327)和59.81%(64/107)。根据样品来源地区,RVA阳性检出率最高的是江苏(57.70%),其次是江西(55.71%),福建、贵州和山西的RVA阳性检出率分别是35.66%、30.00%和22.23%。共获得各地区12株RVA的VP4和VP7基因序列信息,遗传进化分析结果表明,G型中G9为优势基因型(占83.4%),G4和G5分别占8.3%;而P型中P7为优势基因型(占75.0%),其次为P13和P23,分别占16.7%和8.3%;12株RVA分属4种基因型组合,分别为G9P[7](占75.0%)、G5P[13](占8.3%)、G9P[13](占8.3%)和G4P[23](占8.3%)。【结论】我国部分省份猪场RVA阳性检出率持续升高,猪群中RVA基因型复杂多样,优势基因型组合为G9P[7]。因此,今后有必要对猪群中RVA的流行情况进行持续监测,结合基因型致病性制定预防措施并开发针对性疫苗。
- 谷拉强陶然程曦张雪寒周金柱王丹丹王建新王建新
- 关键词：VP4基因VP7基因分子流行病学
- 猪轮状病毒主要非结构蛋白的原核表达、抗体制备及应用被引量：1
- 2024年
- 【背景】轮状病毒(Rotavirus,RV)是全球范围内幼儿和各种幼畜急性病毒性胃肠炎的主要原因之一,在公共卫生中具有重要意义。猪轮状病毒病是一种由猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)引起的一种急性肠道传染病,常造成仔猪消化道功能紊乱,引发严重的呕吐、腹泻和脱水症状,一旦爆发将对养猪业造成重大经济损失。目前,针对PoRV感染尚无特效药物治疗,疫苗接种是控制感染的最经济的途径。然而,PoRV基因型多且易变异,不同基因型之间的交叉保护很不理想。因此,亟需加强对PoRV的流行病学监测和致病机制研究,探索新型防控策略。【目的】利用大肠杆菌原核系统表达PoRV NSP2、NSP4和NSP5非结构蛋白并免疫家兔获得相应多克隆抗体,为PoRV的防控和致病机制研究提供技术手段。【方法】将PoRV的NSP2、NSP4和NSP5基因进行密码子优化后,克隆到pCold-sumo载体中。将测序正确的阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导获得重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达情况。对重组蛋白进行亲和层析柱纯化和定量后,采用皮下多点注射方法接种新西兰大白兔,每隔14 d加强免疫一次,经过3次免疫后制备多克隆抗体。采用间接ELISA方法测定多克隆抗体的效价、间接免疫荧光(IFA)和Western blot验证多克隆抗体与PoRV的反应性。再通过Western blot进一步检测PoRV感染过程中3个非结构蛋白的动态表达,以及鉴定3个重组真核质粒转染的效果。【结果】NSP2、NSP4和NSP5重组菌能够有效表达目的蛋白,SDS-PAGE分析可在目标位置清晰观察到明显条带,并且目的蛋白以可溶性形式存在。3个重组蛋白制备的多克隆抗体,ELISA效价均超过1﹕81000,表明重组蛋白免疫原性良好。IFA结果表明3个多克隆抗体均能够与优势流行基因型轮状病毒发生特异性反应,与其他常见腹泻病原无反应。Western blot结果也展示�
- 卞贤宇李素芬王建新韩楠卢洪婷程曦周金柱陶然朱雪蛟董海龙张雪寒张雪寒
- 关键词：猪轮状病毒非结构蛋白原核表达多克隆抗体
- G1P[7]型猪轮状病毒的分离鉴定及其全基因组分析
- 2025年
- [目的]分离鉴定G1P[7]型猪轮状病毒(PoRV)并进行全基因组分析,为仔猪腹泻病防控及疫苗研发提供理论依据。[方法]腹泻仔猪粪便样本由南京农业大学动物医学院提供,对样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及PoRV PCR检测。向PCR检测结果为阳性的样本上清液中加入胰蛋白酶,随后接种到MA104细胞进行病毒分离和纯化。通过PCR检测、电镜观察、间接免疫荧光检测和RAN-PAGE检测鉴定毒株。通过绘制病毒增殖曲线和检测病毒对MA104、Vero、IPEC-J2、HT-29、HRT-18和Caco-2细胞的易感性探究毒株生物学特性。利用生物信息学软件分析分离毒株的11个基因与国内外各基因型轮状病毒的同源性并构建病毒全基因组系统发育树。[结果]粪便样本PCR检测结果显示,粪便样本中仅PoRV呈阳性。成功分离出1株PoRV,将该毒株命名为JSNJ2023,病毒在MA104细胞上能稳定增殖和传代,经3次克隆,筛选出适合的克隆株,在第3次克隆中,选择病毒滴度最高的克隆株进行扩大培养,最终成功获得高滴度的单克隆毒株。病毒颗粒呈明显的球形结构,具有清晰的双层衣壳特征,直径约70 nm。间接免疫荧光检测结果显示,JSNJ2023毒株能感染MA104细胞。RNA-PAGE检测结果显示,JSNJ2023毒株具有A群轮状病毒特征性的11条电泳图谱,排列方式为4∶2∶3∶2。病毒增殖曲线显示,接种病毒18 h后JSNJ2023毒株在MA104细胞中的病毒滴度达峰值,随着感染时间的延长,病毒滴度逐渐降低。JSNJ2023毒株对细胞的易感性依次为MA104、IPEC-J2、HRT-18、HT-29、Caco2和Vero细胞。基因同源性分析与系统发育树构建结果显示,JSNJ2023毒株属于猪A群G1P[7]型轮状病毒,其基因型为G1-P[7]-I5。[结论]成功分离获得PoRV JSNJ2023毒株,其属于A群G1P[7]型轮状病毒,基因型为G1-P[7]-I5。JSNJ2023毒株与人、猪及牛�
- 王建新王建新周金柱卞贤宇朱雪蛟李昱辰张雪寒张雪寒
- 关键词：全基因组测序遗传进化分析基因重组
- 天然甘薯红色素的提取工艺
- 尹晴红蔺定运谢一芝刘邮洲陈明耿志明王建新王恒
- 该项目以紫甘薯等原料，运用酸化水溶剂萃取，真空低温浓缩及大孔吸附树脂分离提纯等科学合理的色素加工工艺技术路线，生产出液体和粉剂两种色素产品。采用这项工艺技术生产的天然甘薯红色素，经紫外分光光度计测定，等具有酰基的花色或结...
- 关键词：
- 关键词：紫甘薯色素
- 一种利用柠檬酸化水萃取紫甘薯花色甙的工艺
- 本发明涉及一种天然色素的萃取方法，尤其是利用紫甘薯为原料，以柠檬酸化水溶剂作为主要萃取剂来提取紫甘薯中花色甙的工艺。该工艺其特征是首先将紫甘薯清洗破碎，用4－5％柠檬酸化水溶剂(重量百分比)萃提，以1∶3－1∶4的物料比...
- 尹晴红陈明刘邮洲谢一芝蔺定运王建新李荣林耿志明王恒
- 文献传递
- 柴胡皂苷A体外抑制猪轮状病毒增殖的研究
- 2025年
- 体外筛选对猪轮状病毒(PoRV)有抗病毒作用的中药活性成分,为抗PoRV药物开发和临床防控提供理论依据。从6种中药活性成分中筛选到具有潜在抗PoRV作用的柴胡皂苷A (SSA),采用CCK8方法筛选了SSA在IPEC-J2细胞上药物安全浓度,然后用不同浓度的SSA处理PoRV感染的细胞,通过荧光定量PCR、TCID50及Western-blot实验技术分析SSA对PoRV (NJ2012株、G9P [7]型)增殖的影响;接着从病毒的吸附、入侵、复制及释放等阶段,分析了SSA对PoRV复制阶段的影响;最后通过荧光定量PCR和TCID50实验分析了SSA对不同基因型PoRV (G9P [23]型、G1P [7]型和G4P [23]型)、猴源RV及牛源RV增殖的影响。结果显示,SSA在120μg/mL浓度范围内对IPEC-J2细胞均无明显的毒性作用,SSA分别在20、40、80μg/mL处理浓度下,对Po RV呈现剂量依赖性抗病毒作用;SSA在PoRV复制阶段发挥抗病毒作用,对病毒的吸附、入侵及释放阶段均无明显影响;SSA对不同基因型PoRV、猴源RV及牛源RV均具有不同程度的抗病毒作用。综上,本研究发现SSA具有较好的体外抑制PoRV增殖的作用,且作用于病毒的复制阶段,进一步研究发现SSA对其他不同种属和基因型的RV也具有一定抗病毒作用,初步表明SSA具有潜在的广谱抗RV作用。该研究为开发抗RV药物和临床防控PoRV感染流行提供了一定的理论指导。
- 陶然胡屹屹邓慧程曦韩楠卞贤宇王建新周金柱朱雪蛟张雪寒李彬
- 关键词：柴胡皂苷A猪轮状病毒中药抗病毒
