韩飞
- 作品数：25 被引量：42H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划重庆市教委科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 健康人群肿瘤坏死因子-α基因多态性的分析被引量：2
- 2010年
- 了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308 G/G、G/A、A/A基因型的频率分别为89%、11%、1%,其等位基因的发生频率以G等位基因最常见(93%),其次为A等位基因(7%)。TNF-A-857 C/C、C/T、T/T基因型的频率分别为68%、36%、8%,其等位基因发生频率以C等位基因最常见(81%),其次为T等位基因(19%)。由结果可以得出重庆地区汉族健康人群TNF-A-308位点存在G/A多态性,TNF-A-857位点存在C/T多态性。
- 向瑜杨致邦李永国韩飞苏善平郭丽媛
- 关键词：基因多态性肿瘤坏死因子-Α
- HP1188-IgY对感染幽门螺杆菌BALB／c小鼠的治疗作用
- 2015年
- 目的:评价抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)HP1188蛋黄抗体(HP1188-immunoglobulin yolk,HP1188-Ig Y)对BALB/c小鼠胃内H.pylori感染的治疗效果。方法:建立H.pylori感染BALB/c小鼠的动物模型,将建模成功的80只小鼠随机分为8组,每组10只。第1组(抗生素治疗组)、第2组(1 mg HP1188-Ig Y)、第3组(1 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)、第4组(5 mg HP1188-Ig Y)、第5组(5 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)、第6组(PBS对照组)和第7组(30%硫糖铝对照组)分别连续治疗10 d,每天1次;第8组间隔48 h皮下注射2.5 mg HP1188-Ig Y,共2次;另10只正常小鼠为第9组(健康对照组)。处理完成2周后取各组小鼠胃组织作H.pylori培养、快速尿素酶试验、PCR检测H.pylori特异性vac A和cag A及病理组织学检查,观察H.pylori清除情况并进行评分。结果:在小鼠体内,灌胃(1 mg HP1188-Ig Y+30%硫糖铝)即可有效治疗H.pylori感染引起的胃黏膜损害,其治疗效果与抗生素相似。结论:成功构建了H.pylori感染的BALB/c小鼠模型,选择30%硫糖铝为抗体保护剂,经口服HP1188-Ig Y可抑制小鼠胃内H.pylori感染。
- 韩飞杨致邦李建英周政彭方毅姜海蓉杜红心
- 关键词：幽门螺杆菌硫糖铝
- 一种用于肺癌主要亚型快速诊断的qRT-PCR检测试剂盒及用途和检测方法
- 本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于肺癌主要亚型快速诊断的qRT‑PCR检测试剂盒及应用和检测方法。所述试剂盒包括逆转录试剂和PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括肺癌相关基因的三种剪切体的上下游引物和内参基因的上下...
- 韩飞朱婧陈丹谢承婷帖红涛刘太行别梦军
- 幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达被引量：2
- 2010年
- 目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在H.pylori的黏附过程中的作用奠定基础。方法:以H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Westernblot鉴定相应抗原表位。结果:扩增的hp1188基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30600Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白。目标蛋白纯化后均一性接近90%,Westernblot证实与多克隆抗体有良好结合能力。结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
- 韩飞杨致邦
- 关键词：幽门螺杆菌
- 一种用于肺癌主要亚型诊断的免疫组化试剂盒及用途和检测方法
- 本申请属于生物医药领域，具体涉及一种用于肺癌主要亚型诊断的免疫组化试剂盒及用途和检测方法。所述检测方法的步骤为：(1)制备石蜡组织样本；(2)对石蜡组织样本依次进行切片、烤片和脱蜡水化处理；(3)消除组织切片中的内源性过...
- 韩飞谢承婷帖红涛陈丹李谦朱婧
- 两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较被引量：6
- 2009年
- 目的比较Ni2+-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni2+-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni2+-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。
- 范贵荣杨致邦田一玲向瑜郭丽媛韩飞
- 关键词：幽门螺旋杆菌包涵体重组蛋白
- 幽门螺杆菌hp1188基因的克隆及高效表达
- 2009年
- 目的克隆并表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用PCR法从H.pylori标准株NCTC11637基因组DNA中扩增hp1188基因,克隆入原核表达载体pQE-30,构建重组原核表达质粒pQE30-hp1188,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达形式和表达量。表达蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化,Western blot鉴定其反应原性。结果所构建的重组表达质粒pQE30-hp1188序列完整,插入的基因片段全长810bp,与GenBank中的hp1188基因同源性达98%。表达的重组蛋白相对分子质量约为30600,以1.0mmol/L IPTG诱导4h,表达量最高,破菌上清和沉淀中均有表达,可溶性蛋白表达量占全菌总蛋白的47%。重组蛋白纯化后纯度可达90%,并可被H.pylori患者血清识别。结论已成功克隆了H.pylori hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
- 韩飞杨致邦郭丽媛范贵荣向瑜
- 关键词：幽门螺杆菌克隆
- 147株金黄色葡萄球菌耐药现状分析被引量：8
- 2012年
- 目的研究金黄色葡萄球菌(SAU)临床分离株的耐药性,为合理使用抗菌药物提供依据。方法采用VITEK2Compact型全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,统计分析147株SAU的标本分布及耐药率。结果分泌物标本SAU检出率最高;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率达40.1%(59/147)。SAU对多种抗菌药物具有不同程度的耐药性,对呋喃妥因、利奈唑胺、奎努普汀/达福普汀、替加环素、万古霉素敏感率为100.0%。结论 SAU临床分离株耐药现状严重,MRSA的耐药情况更为严重,临床微生物实验室应加强MRSA监测工作。
- 韩飞李建英牟君成周政
- 关键词：金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性
- 幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达被引量：1
- 2011年
- 目的表达幽门螺杆菌(H.pylori)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从H.pylori标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-NTA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。
- 韩飞杨致邦
- 关键词：克隆
- 聚苯乙烯微/纳米塑料对睾丸支持细胞间质表型转化的影响
- 2025年
- 目的探讨聚苯乙烯微/纳米塑料(polystyrene micro/nanoplastics,PS-MNPs)对睾丸支持细胞的影响及潜在机制。方法60只8周龄C57BL/6N雄性小鼠按照完全随机法分为(n=20):Ctrl组(去离子水)、聚苯乙烯纳米塑料(polystyrene nanoplastics,PS-NPs)组[粒径为20 nm,2.5 mg/(kg·d)]和聚苯乙烯微米塑料(polystyrene microplastics,PS-MPs)组[粒径为5µm,2.5 mg/(kg·d)]。每日灌胃1次,持续6个月。采用HE染色分析睾丸组织病理形态差异;标志蛋白免疫组化分析支持细胞数量变化。采用GO和KEGG富集分析睾丸转录组富集的功能及信号通路。使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4)作为研究模型,分为Con组(去离子水)、2.5NPs组(粒径为20 nm,2.5µg/mL)和2.5MPs组(粒径为5µm,2.5µg/mL),各组TM4细胞均连续处理至130代,CCK-8法及EdU检测细胞活性与增殖能力,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移能力,利用RT-qPCR和Western blot检测调控间质表型转化关键分子mRNA和蛋白水平表达变化。结果病理学分析结果显示,与Ctrl组相比,PS-NPs和PS-MPs组小鼠的睾丸曲细精管间距增大,生精细胞排列松散,并伴有空泡化程度增加。标志蛋白免疫组化结果显示,PS-NPs和PS-MPs组小鼠的睾丸支持细胞数量与Ctrl组相比呈下降趋势,其中PS-NPs组差异具有统计学意义(P<0.01)。对暴露睾丸组织转录组筛选的差异基因进行GO和KEGG富集分析发现,PS-MNPs暴露相关变化基因明显富集到细胞黏附分子信号通路(P<0.05)。PS-MPs暴露TM4细胞明显抑制细胞生长及细胞迁移能力(P<0.05);PS-NPs暴露TM4细胞对细胞生长没有明显影响,但能明显增强细胞迁移能力;PS-NPs暴露后抑制E-cadherin和ZO-1的蛋白表达水平(P<0.01),上调N-cadherin和Vimentin的表达(P<0.01);PS-MPs暴露后上调Vimentin的表达(P<0.01),下调E-cadherin、N-cadherin及ZO-1的表达(P<0.05);PS-MPs和PS-NPs暴露上调Snail2、Twist1和Zeb2的mRNA水平(P<0.01)。结论PS-MNPs暴露会导致TM4细胞增殖和�
- 蔡景文乙先张慧莲李燚韩飞
- 关键词：聚苯乙烯睾丸损伤纳米塑料睾丸支持细胞
