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新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究被引量：1: 2006年; 孕22周的胎肝是胎儿的主要造血器官,其中含有大量与造血相关的调控因子。人碱性Krüppel样因子(humanbasicKrüppel-likefactor,hBKLF)是本研究室从这一时期胎肝cDNA文库中新克隆的转录因子。对其C端的结构分析发现,它含有3个特征性C2H2锌指结构,因此属于KLF转录因子家族。前期的表达谱研究工作显示,hBKLF在成人外周血白细胞、骨髓和胎肝中表达量高,在红系中有表达,这提示它可能与造血相关。本研究以K562细胞为模型,研究hBKLF与造血细胞增殖、分化及血红蛋白合成的关系。构建hBKLF正义及反义真核表达载体,转染K562细胞,经G418筛选4周,得到稳定细胞株;用RT-PCR、Westernblot方法测定转染后K562细胞hBKLF表达水平的变化;以转染空质粒的K562细胞为对照组,在显微镜下直接观察转染正义质粒和反义质粒的两组细胞形态的改变;用MTT法比较增殖速率的变化;用甲基纤维素半固体培养法比较集落形成率的差别;用苯息丁法观察氯高铁血红素(hemin)诱导K562细胞分化后血红蛋白合成水平的差异。结果表明正义质粒和反义质粒经NcoI酶切鉴定构建正确。转染正义质粒的K562细胞(正义组)中hBKLF的mRNA及蛋白质表达水平增加,转染反义质粒的K562细胞(反义组)中hBKLF的mRNA水平降低。增殖活性在反义组、正义组、对照组分别为1.335±0.022、1.067±0.010、1.118±0.014,反义组K562细胞的增殖速率加快,正义组细胞增殖速率减慢(P<0.001)。细胞形态在各组间无明显区别。集落形成率在反义组、正义组、对照组分别为148±13、136±10、141±10,各组间无显著差异(P>0.05)。3组细胞血红蛋白合成水平在hemin诱导后均升高,诱导后血红蛋白升高倍数在对照组、反义组、正义组分别为9.064±1.637、14.360±2.185、4.820±0.404,反义组K562细胞合成血红蛋白能力增加,正义组合成血红蛋白能力下降(P<0.05)。结论hBKLF可以抑制K562细胞的增�; 王茫桔马晓芸石永进武淑兰贺福初; 关键词：血红蛋白 K562 细胞增殖细胞分化

小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性的研究: 目的钙调素拮抗剂小檗胺（Berbamine,BBM）是一种具有升高白细胞、抗肿瘤等多种药理作用的双苄基异喹啉类生物碱,目前作为升白细胞药物广泛用于临床,鉴于其对血管平滑肌细胞内游离钙的影响与维拉帕米相似,本文以阿霉素耐药...; 石永进韩艳秋武淑兰; 关键词：小檗胺耐药性 ADR; 文献传递

“金龙胶囊”抑制HL-60细胞生长并诱导细胞凋亡被引量：13: 2002年; 目的:研究中药金龙胶囊冻干粉(Jin Long Capsules,简称JLC)对人白血病细胞的作用及其机制。方法:应用台盼兰拒染法观察0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml JLC对HL-60细胞的抑制作用,光镜及透射电镜观察细胞结构变化,DNA电泳、流式细胞术等检测细胞凋亡。结果:1.JLC可抑制HL-60细胞的生长,这种作用呈剂量和时间依赖性;2.JLC作用后细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA片段化,流式细胞仪可检出亚G_1期细胞;3.JLC作用后细胞阻滞于G_0/G_1期,S期细胞减少。结论:金龙胶囊冻干粉对白血病细胞有诱导凋亡作用,主要作用于S期。; 赵冬梅石永进关大创曹香红刘素宾武淑兰; 关键词：HL-60 金龙胶囊细胞凋亡中药

三氧化二砷诱导U266骨髓瘤细胞p16基因重新表达: 目的探讨三氧化二砷（AsO）通过干扰DNA甲基化诱导U266骨髓瘤细胞抑癌基因p16重新表达的可能性,以进一步阐明AsO的抗肿瘤作用机制。方法体外培养骨髓瘤细胞系U266,加入终浓度分别为0.5μM/L、1.0μM/L和...; 黎金庆李渊武淑兰; 关键词：骨髓瘤细胞三氧化二砷 P16; 文献传递

人血小板膜糖蛋白Ⅵ胞外区片段在大肠杆菌中的表达及纯化: 本实验利用PCR技术扩增GPVI胞外区第2个Ig-C样结构区域(第123～268位氨基酸),并在原核表达系统pGEX-3x中获得了融合蛋白的可溶性表达.通过GST凝胶亲合层析技术,纯化得到融合蛋白,为进一步研究GPVI的...; 屈晨雪李传保王建中武淑兰万文徽; 关键词：聚合酶链反应血小板膜糖蛋白大肠杆菌; 文献传递

人血小板膜糖蛋白VI胞外区片段的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2005年; 目的探讨在原核细胞中表达人血小板膜糖蛋白Ⅵ(GPVI)胞外区片段,制备其多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增人血小板GPVI胞外区片段123aa^268aa的基因序列,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达。表达产物经亲和层析法纯化及鉴定后,免疫家兔制备多克隆抗体。采用已知单克隆抗体进行ELISA双抗夹心法、Westernblot和流式细胞术鉴定其特异性。结果构建的重组质粒经酶切和测序证实序列正确。经诱导表达在相对分子量为4200处有一条明显融合蛋白条带,Westernblot分析证实与预期值一致。所得的抗血清效价为1∶128,ELISA双抗夹心法检测表明,所制抗体识别血小板GPVI分子。Westernblot和流式细胞术检测结果显示所制抗体可与血小板裂解液中及血小板膜表面GPVI分子发生特异性免疫反应。结论利用原核细胞表达的人血小板GPVI分子胞外区片段能有效地诱发动物产生多克隆抗体,所得抗体与人血小板上GPVI分子特异性结合,为深入研究GPVI分子提供了工具。; 屈晨雪李传保王建中武淑兰万文徽; 关键词：血小板多克隆抗体

人类基因组DNA单核苷酸多态性的检测方法被引量：3: 2002年; 单核苷酸多态性 (SNP)作为新的遗传标记对基因定位及相关疾病的研究意义重大。本文对近年来 9种SNP检测方法的原理、应用及优缺点 ,包括基于 FRET原理的 Taqman法和分子灯塔法 ;基于分子杂交技术的寡核苷酸连接分析、等位基因特异性寡核苷酸探针杂交法、动态等位基因特异性杂交法及 DNA芯片法 ;及质谱法。; 李渊武淑兰; 关键词：单核苷酸多态性基因检测方法分子杂交分子探针基因芯片人类基因组

小檗胺下调MCF7及MCF7/ADR细胞Suivivin表达被引量：1: 2005年; 目的探讨钙调蛋白拮抗剂小檗胺(BBM)下调抗凋亡基因Survivin表达的可能性。方法采用人乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素(ADR)MCF7/ADR细胞与不同浓度BBM培养72h后,采用半定量RT-PCR法检测SurvivinmRNA表达。结果20μmol/LBBM使MCF7和MCF7/ADR细胞SurvivinmRNA表达分别由0.43±0.02下降至0.21±0.04和0.57±0.05下降至0.45±0.04(P值均<0.01)。结论BBM可下调MCF7和MCF7/ADR细胞SurvivinmRNA表达。; 韩艳秋武淑兰; 关键词：小檗胺下调人乳腺癌细胞 PCR法检测抗凋亡基因耐阿霉素

小檗胺逆转MCF7/ADR细胞耐药性及其机制探讨被引量：5: 2004年; 目的　探讨钙调素拮抗剂小檗胺 (BBM)逆转多药耐药的可能性及其机制。　方法　乳腺癌细胞MCF7及其耐阿霉素 (ADR)MCF7 ADR细胞与ADR及不同浓度BBM共培养 ,经四唑盐 (MTT)比色法计算半数抑制浓度 (IC50 )、耐药倍数和增敏倍数 ;流式细胞仪检测细胞内ADR相对含量和P糖蛋白 (P gp)表达水平 ;半定量RT PCR检测mdr1基因mRNA表达。　结果　ADR对MCF7和MCF7 ADR的IC50 分别为 (0 98± 0 0 6 ) μmol L和 (10 1 2 0±5 72 ) μmol L ;MCF7 ADR对ADR的耐药倍数为 10 3。MCF7 ADR细胞 5 μmol L、10 μmol L和 2 0 μmol LBBM时对ADR呈剂量依赖性增敏作用 ,增敏倍数分别为 2 76、5 88和 2 8 2 6倍 (均P值 <0 0 1)。用 10 μmol 或 2 0 μmol LBBM处理MCF7 ADR细胞 2h ,细胞内的ADR相对含量增加 2 4 9和 2 81倍 (P <0 0 1) ;处理 72h使P gp表达分别下降10 0 9%和 6 2 82 % (均P值 <0 0 1) ,且mdr1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。　结论　BBM提高耐药细胞MCF7 ADR胞内的ADR浓度 ,下调mdr1基因及P gp的表达 ,使其对ADR的敏感性显著增高。; 韩艳秋石永进袁家颖朱燕武淑兰; 关键词：小檗胺逆转耐药性 P糖蛋白 MDRL基因

急性白血病/骨髓增生异常综合征患者DNA甲基转移酶亚型的表达: 目的探讨人类DNA甲基转移酶(DNMT)亚型与急性白血病(AL)发病及骨髓增生异常综合征(MDS)向AL转化的关系。方法本文采用RT—PCR技术,对75例急性白血病/MDS患者的DNMT1、3A及3B的mRNA表达进行了...; 李渊武淑兰卜定方朱燕朱强曹香红; 关键词：急性白血病 MDS 骨髓增生异常综合征甲基转移酶; 文献传递

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武淑兰

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