杨颖
- 作品数：59 被引量：164H指数：8
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技支撑计划贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌Nissle 1917 FliC高变区缺失的构建、原核表达及体外TLR5活性检测
- 2025年
- 运用生物信息技术分析FliCEcN的结构和潜在的抗原表位;借助ClonExpress?同源重组技术设计引物,缺失FliCEcN高变区不同结构域,并克隆至pET-28a(+)表达载体中表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定鞭毛蛋白变体;采用鲎试剂显色法检测鞭毛蛋白变体中内毒素残留,并使用不同质量浓度的鞭毛蛋白变体刺激Caco-2细胞,通过检测IL-8的分泌水平来评估各鞭毛蛋白变体的生物学活性。生物信息分析结果显示,FliCEcN高变区的多数结构域被预测为含有潜在的抗原表位;PCR结果显示,fliC_(△820~1518)、fliC_(△736~963)、fliC_(△985~1200)、fliC_(△748~828)、fliC_(△1114~1191)和fliC_(△1225~1311)分别约为1095、1566、1578、1713、1716、1707 bp;SDS-PAGE结果显示,经镍柱纯化处理和透析复性的鞭毛蛋白变体分别约为41.36、57.06、57.50、61.97、61.95、61.56 kDa;Western blot结果显示,6个鞭毛蛋白变体均能与抗His单克隆抗体和大肠杆菌H7抗原诊断血清发生特异性反应;TLR5活性检测结果显示,缺失不同结构域的鞭毛蛋白变体保留了其TLR5激动剂功能。结果表明,本试验成功构建了6种FliC_(EcN)缺失高变区不同结构域的鞭毛蛋白变体,且各鞭毛蛋白变体均保留了其TLR5激动剂功能,展现了良好的生物学特性,为进一步研究鞭毛蛋白在缺失不同结构域后的佐剂效应以及鞭毛蛋白抗体滴度对其佐剂效应影响提供了参考依据。
- 周桂仙吴诗卉王敏乐廖义潇李双杨泽敏杨颖
- 关键词：鞭毛蛋白佐剂原核表达
- 一例鸭病毒性肠炎的诊断
- <正>引言鸭病毒性肠炎又称鸭瘟,是由鸭病毒性肠炎病毒(DEV)引起的鸭、鹅和及其他雁形目禽类的一种急性、热性、败血型疾病,尤其是老年鸭死亡率高。发病初期,病鸭精神沉郁,头颈缩起,饮水量增加,之后高热稽留(体温高达42.5...
- 张明洋贺欣薇胡安东潘吉脉张杨子杨颖文明
- 关键词：鸭病毒性肠炎头颈部鸭病毒性肠炎病毒共济失调
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征NSP2原核表达与鼠源抗体的制备
- 引言1995年猪的繁殖与呼吸综合征（PRRS）登陆我国,我国的养猪业每年都因为该病遭受巨大的经济损失,在2006发现一种新型的,毒力更强的PRRSV毒株,PRRSV正在不断变异,高致病性蓝耳病的变异与NSP2的位点缺失有...
- 管国丹温贵兰杨颖
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征原核表达
- 文献传递
- 绿原酸干预鸭肠炎病毒感染鸭胚成纤维细胞的代谢组学分析
- 2024年
- 为探究绿原酸对鸭肠炎病毒(DEV)感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)代谢组学的影响,本研究首先通过CCK-8法筛选绿原酸对DEF的最适作用浓度,结果显示绿原酸最佳作用浓度为0.250 mg/mL。将DEF分别设置空白对照组(DEF)、绿原酸对照组(经0.250 mg/mL绿原酸溶液作用的DEF)、DEV感染组(DEV病毒液感染的DEF)和绿原酸干预组(0.25 mg/mL绿原酸溶液作用DEF后接种DEV病毒液),培养至24 h、36 h和48 h时的各组DEF,经CCK-8检测细胞活性后,采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定各组细胞间的差异代谢物,经MetaX软件筛选各组细胞间显著差异代谢物,KEGG分析显著差异代谢物富集的信号通路,并进一步采用荧光定量RT-PCR检测上述各组细胞中DEV NP基因拷贝数,分析DEV的增殖情况。结果显示:与空白对照组相比,绿原酸对照组在3个时间点的细胞活性差异均不显著(P>0.05),而DEV感染组的细胞活性均极显著下降(P<0.01),绿原酸干预组在24 h和36 h时的细胞活性均显著下降(P<0.05),48 h时极显著下降(P<0.01);与DEV感染组相比,绿原酸干预组在3个时间点的差异代谢物分别有28、31和21个,差异代谢物主要是六亚甲基双乙酰胺、S-乳酰谷胱甘肽、L-谷氨酸,L-蛋氨酸、吲哚-3-乙酸、甲酰基-L-蛋酰肽等,富集的信号通路主要有半胱氨酸与蛋氨酸代谢、酪氨酸代谢、苯丙氨酸代谢、色氨酸代谢等代谢通路。荧光定量RT-PCR检测结果显示,与空白对照组相比,DEV感染组DEV NP基因拷贝数在3个时间点均显著上升(P<0.05);与DEV感染组相比,绿原酸干预组DEV NP基因的拷贝数在3个时间点均显著下降(P<0.05)。上述结果表明,绿原酸通过调控DEF细胞半胱氨酸和蛋氨酸等氨基酸代谢通路抑制DEV增殖,该结果为绿原酸在鸭病毒性肠炎等疾病防治中的应用提供了科学依据。
- 杨芸芸张黔东冯轶文安林杨颖文明文明
- 关键词：鸭肠炎病毒绿原酸鸭胚成纤维细胞代谢通路
- 鞭毛蛋白诱导表达差异基因的分析被引量：1
- 2023年
- 试验旨在分析鞭毛蛋白刺激机体基因表达谱的特征,揭示鞭毛蛋白佐剂的作用机制。从GEO数据库筛选目标微阵列GSE46421和GSE72016及其差异表达基因(DEGs),经DAVID分析DEGs参与的GO功能注释和KEGG信号通路、String构建DEGs的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、Cytoscape可视化PPI网络并筛选高连通度的PPI子模块和hub基因。结果显示,共筛选出182个DEGs,包含上调基因161个、下调基因121个。DEGs参与GO生物过程主要有信号转导、免疫应答、炎症反应、细胞凋亡等,参与分子功能包含激酶激活、受体结合、细胞因子激活、膜信号转导。DEGs参与KEGG通路涵盖细胞因子-细胞因子受体相互作用、TNF信号通路、NF-κB信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等免疫相关途径。分析DEGs的PPI网络发现,2个重要的PPI子模块和10个关键基因(IL-10、IL-6、CCL2、CXCL2、NFKBIA、MyD88等)。研究表明,鞭毛蛋白通过识别TLR5和NOD样受体,触发MyD88依赖性和MyD88非依赖性途径发出信号,激活转录因子NF-κB,这些信号通过级联反应激活机体免疫系统、诱导机体产生多种细胞因子和趋化因子,发挥佐剂效应。
- 李双杨泽敏廖义潇杨颖
- 中药雷公藤主要成分的毒副作用及解决策略被引量：1
- 2024年
- 中药雷公藤对类风湿性关节炎、糖尿病、肾病等多种疾病具有疗效,但其对肝脏、心脏、肾脏等多个器官系统存在毒副作用,导致雷公藤的使用产生安全性问题。随着技术的进步,多种减毒策略逐渐出现,研究者不仅运用炮制、中药配伍、改变给药剂型等方法对雷公藤进行减毒增效,还通过生物信息学技术结合多种现代生物学手段研究中药雷公藤有毒成分的作用机制,进而减除其有毒成分,为解决雷公藤存在的毒副作用,提高其利用率提供了新的途径。本综述对目前已有的提取中药雷公藤有毒成分的筛选方法进行归纳总结,同时探讨利用生物信息学的方法预测中药雷公藤毒性成分的靶点,为雷公藤的减毒研究奠定基础。
- 王怡然温贵兰杨颖
- 关键词：雷公藤毒副作用
- 鸭瘟强毒人工感染雏鸭的显微和超微病理学变化被引量：7
- 2017年
- 为了解鸭瘟病毒(DPV)人工感染雏鸭后的组织器官病变规律、感染后病毒分布情况及细胞超微结构变化,试验以DPV GZ强毒株人工感染90羽15日龄健康雏鸭,分别在感染后3、6、10、18、30、48、72、96、108 h剖杀,采用PCR技术进行病原鉴定,并通过光学显微镜和透射电镜进行病理组织显微和超微结构观察。结果显示,人工感染3 h后即可通过PCR技术检测出DPV核酸;透射电镜观察表明感染后10 h可在脾脏中首先观察到少量的病毒,30 h后胸腺开始发现病毒,病毒的数量随感染时间增加逐渐增加;感染18 h后,中枢免疫器官胸腺表现为淋巴细胞数量降低,组织间隙增大;脾脏组织病变严重,其余器官组织结构均出现程度较轻的组织损伤;感染后30 h,中枢免疫器官的淋巴细胞极度减少,器官组织结构模糊不清,出血较为严重;一些器官则出现细胞肿胀,肠道等器官组织也有细胞变性、出血等病理变化;在死亡鸭的肝脏、脾脏、十二指肠、胸腺发现数量极多的病毒。对照组鸭组织中未发现病理变化。这些研究结果可以为鸭瘟病毒的致病机制研究和鸭瘟的病理学诊断提供试验依据。
- 刘忠伟杨颖江楠罗乐文明
- 关键词：鸭瘟病毒雏鸭组织病理变化超微结构变化
- 兽医免疫学实验教学改革与探索被引量：1
- 2023年
- 兽医免疫学是动物医学专业的重要专业课之一,由理论课和实验课2个部分组成,通过该课程学习不仅可以提高学生们的学习兴趣,而且可以为之后学生的就业打下坚实的基础。本文主要分析了当前贵州大学动物科学学院兽医免疫学实验教学中存在的问题,并提出了线上线下混合方式、翻转课堂等现代教学创新模式及融入思政要素等实验教学和考核创新改革,旨在提高兽医免疫学实验教学课程质量,为社会培养合格的兽医专业人才,服务社会。
- 陈佳琪嵇辛勤程振涛程振涛杨颖温贵兰
- 关键词：动物医学专业实验教学改革
- 细菌鞭毛蛋白作为新型佐剂和免疫治疗剂的研究进展
- 2025年
- 近年来,许多微生物成分已被用作免疫增强剂,以参与抗原的免疫应答过程,从而增强免疫原性差的疫苗的免疫反应。鞭毛蛋白作为一种有效的激动剂,可以激活Toll样受体5(TLR5)和NOD样受体4(NLRC4)这两条信号通路,进而激发机体的固有免疫和适应性免疫反应。此外,鞭毛蛋白还具有低毒性、制备简单及改造空间大的优点,已成为极具临床应用前景的新型候选佐剂和免疫治疗剂。论文就鞭毛蛋白结构、免疫刺激效应进行系统概述,并重点探讨其作为免疫佐剂和治疗剂的研究进展。在此基础上,进一步展望鞭毛蛋白在疫苗研发、抗肿瘤及抗辐射等方面的潜在应用价值。通过深入分析鞭毛蛋白的特性和功能,以期为未来的生物医学研究提供新的思路和方法。
- 周桂仙吴诗卉王敏乐廖义潇李双杨泽敏鲜思美杨颖
- 关键词：鞭毛蛋白佐剂信号通路疫苗
- 基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用被引量：4
- 2022年
- 为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。
- 王微张霞张人俊胡安东杨颖温贵兰温贵兰
- 关键词：间接ELISA方法
