时运
- 作品数：24 被引量：51H指数：3
- 供职机构：南通大学附属医院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目江苏省临床医学科技专项中国博士后科学基金更多>>
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- 下调缺氧诱导因子-1表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:观察肝癌缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1alpha,HIF-1)表达及靶向其基因转录对肝癌细胞增殖的影响.方法:以自身配对法收集术后肝癌及癌周组织,免疫组织化学染色法分析HIF-1胞内表达及分布;按照HIF-1基因序列合成miRNA,筛选干扰效率最佳者转染肝癌(HepG2)细胞,以荧光定量-PCR和Western blot分别检测HIF-1转录和蛋白表达;并以miRNA转染联合阿霉素后,流式细胞仪检测沉默细胞中HIF-1对HepG2细胞增殖的影响.结果:肝癌及癌周组织HIF-1表达呈棕黄色颗粒状,位于胞浆和部分胞核,呈均匀表达,中央静脉周围明显;其阳性率癌组织为80%,低于癌旁100%表达(2=22.35,P<0.001);与瘤体大小和分化程度相关;HepG2细胞经miRNA干扰后,HIF-1在RNA和蛋白水平分别下降87%和56%,发生细胞凋亡(22.46%±0.61%)和G1期阻滞(61.49%±1.12%,P<0.01);加入阿霉素后细胞凋亡率和G1期细胞分别增至36.99%±0.88%和65.68%±0.91%.结论:HIF-1过表达与肝癌密切相关,以特异性miRNA靶向HIF-1,可调控细胞周期,通过加速凋亡的机制抑制癌细胞增殖.
- 王理姚敏顾星时运邱历伟陆少林姚登福
- 关键词：肝癌缺氧诱导因子-1MIRNA基因沉默增殖抑制
- 炎症性介质核因子-κ B活化干预抑制肝癌细胞增殖
- 顾星时运张洁王司晔吴玮姚登福
- 肝癌NF-κB异常表达及转录干预对多药耐药的逆转效果
- 目的 分析肝病患者核因子-κB(NF-κB)及P-糖蛋白(P-gp)表达并探讨干扰NF-κB基因转录对肝癌多药耐药(MDR)逆转效果与机制.方法 以酶联免疫吸附法定量检测294例肝病患者血NF-κB和P-gp浓度;培养肝...
- 潘刘翃顾星王理蔡胤吴玮时运董志珍姚登福
- 关键词：肝细胞性肝癌NF-ΚBP-GP多药耐药逆转
- 乙型肝炎病毒相关肝癌组织及外周血膜联蛋白A2异常表达的临床意义被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染对肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及外周血中膜联蛋白A2(annexinA2,ANXA2)表达的影响.方法:以自身配对法收集30例术后肝癌组织、癌旁组织和远癌组织,以Western blot法和免疫组织化学法分析肝组织ANXA2表达与细胞中分布;并以生物素标记的HBV DNA探针检测肝组织中HBV DNA,以实时定量PCR技术分析肝组织ANXA2 mRNA转录与表达水平;以ELISA法定量肝病患者血ANXA2水平,分析其临床价值.结果:肝组织ANXA2表达定位于癌细胞的胞浆和胞膜,癌旁组织定位于胞浆;癌组织显著高于癌旁组织(F=498.221,P<0.001),远癌组织则未见明显表达;癌灶组织中ANXA2基因呈过转录状态,显著高于癌旁与远癌组织;在HBV阳性肝癌组织中,ANXA呈中等至强阳性全数表达,在HBV阴性肝癌组织ANXA呈低阳性表达,组间差异显著(Z=4.933,P<0.001).血ANXA2水平,肝癌患者显著高于良性肝病各组(P<0.01),其表达与HBV感染(t=6.820,P<0.001)、伴肝外转移(t=3.191,P=0.002)、门静脉癌栓(t=2.859,P=0.005)、中低程度分化和TNM分期间显著相关(P<0.01),但与患者性别、年龄、肿瘤大小和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein)水平间未见明显相关;血ANXA2与AFP联检,其诊断阳性率为96.5%.结论:HBV相关肝癌ANXA2过表达,有助于HCC诊断和发病机制解析.
- 陈雯张海健顾星时运钱琦姚登福陆少林
- 关键词：肝细胞癌膜联蛋白A2乙型肝炎病毒感染
- 肝癌患者核因子-κB异常表达及转录干预对多药耐药的逆转效果被引量：14
- 2016年
- 目的分析肝病患者核因子-κB（NF-κB）及P-糖蛋白（P-gp）表达并探讨干扰NF-κB基因转录对肝癌多药耐药（MDR）逆转效果与机制。方法以酶联免疫吸附法定量检测294例肝病患者血NF-κB和P-gp浓度；培养肝癌HepG2细胞，加入阿霉素、以特异性小干扰RNA（siRNA）下调NF-κB基因转录，以Western印迹检测蛋白表达，以荧光定量聚合酶链反应分析基因转录水平。结果从慢性肝炎、肝硬化到肝癌的进展过程中NF-κB[（0．55±0．27）、（0．76±0．74）、（2．76±3．42）μg/L]和P-gP[（6．80±3．92）、（7．22±4．95）、（12．44±9．63）μg/L]呈渐进性高表达。肝癌组NF-κB和P-gP水平显著高于肝硬化、慢性肝炎和对照组（P〈0．001）。肝癌患者伴HBV感染与NF-κB（t=2．14，P〈0．05）和P-gP（t=5．50，P〈0．001）表达明显相关；介入化疗用药次数或时间延长均显著升高[46例肝癌3次及以上介入化疗后NF-κB达（5．75±5．60）μg/L]；肝癌术后均显著下降（P〈0．001）。肝癌HepG2细胞加阿霉素后培养，NF-κB和P-gP表达增强；siRNA干预HepG2细胞或阿霉素处理后的耐药HepG：细胞，NF-κB和P-gP表达均明显减低，使HepG2细胞对阿霉素更敏感。结论NF-κB和P-gP参与肝癌MDR形成，干预NF-κB活化可抑制P-gp表达，有助于逆转肝癌MDR。
- 姚敏顾星王理蔡胤吴玮时运董志珍姚登福
- 关键词：核因子-ΚBP-糖蛋白多药耐药逆转
- 下调膜联蛋白A2基因转录对肝癌细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察下调膜联蛋白A2（annxin A2，ANXA2）表达对肝癌（HCC）细胞生物学行为的影响。方法以定量PCR分析不同肝癌细胞ANXA2 mRNA转录水平，以Western blot分析ANXA2表达；以免疫荧光检测ANXA2在细胞内表达和分布；以碘化丙啶染色和流式细胞术分析细胞周期；以CCK-8试剂盒分析细胞增殖潜能；以transwell实验分析其侵袭潜能；以创伤愈合试验分析其迁移潜能；以裸鼠移植瘤模型分析其致瘤潜能。两样本均数比较用t检验，率的比较用x^2检验，等级资料比较用秩和检验，多样本均数的两两比较采用口检验，组间差异用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC97-H细胞ANXA2表达明显高于HepG2、SMMC-7721和SMMC-7402和L02细胞；特异性shRNA沉默ANXA2效率在80％以上；免疫荧光显示ANXA2定位于细胞膜和细胞质，胞核少见；下调ANXA2表达明显下调HCC细胞s期比例（口=8．001，P=0．002），抑制细胞增殖（q=17．140，P＜0．01）、迁移潜能（q=12．808，P＜0．01）和侵袭潜能（q=9．069，P=0．002）；裸鼠移植瘤模型显示干扰组瘤重下降（g=11．968，P＜0．01），瘤体中ANXA2表达下调（Z=2．530，P=0．011）。结论下调ANxA2基因转录显著影响肝癌细胞的生物学行为，可望成为肝癌分子治疗的潜在靶目标。
- 张海健姚敏钱琦时运李景源陈心王司晔姚登福
- 关键词：肝细胞膜联蛋白A2生物学行为
- NF-κB信号通路干预逆转肝癌多药耐药及其机制研究
- <正>目的肝细胞性肝癌(HCC)的发生、发展及多药耐药(MDR)形成过程中,NF-κB异常活化、参与并发挥作用,但在MDR发生中的作用机制有待阐明。定量分析良、恶性肝病患者NF-κB及MDR相关P-gp表达;以肝癌模型观...
- 时运时杨张洁姚登福
- 关键词：肝癌多药耐药机制转录因子-ΚB信号通路
- 文献传递
- NF-κB信号通路活化干预对肝癌MDR的影响与机制研究
- 目的:定量分析良、恶性肝病患者外周血NF-κB及MDR相关p-糖蛋白(P-gp)表达水平;以肝癌形成的动物模型,观察肝细胞恶性转化过程中NF-κB及p-gp动态表达规律;并以siRNA干扰NF-1κB基因转录或与阿霉素联...
- 时运顾星钱琦时杨姚登福
- 关键词：肝癌信号通路多药耐药性
- 文献传递
- 肿瘤坏死因子α/核因子-κB信号通路活化干预对肝癌细胞增殖的抑制作用被引量：12
- 2014年
- 目的 探讨干预肿瘤坏死因子(TNF)α/核因子-κ B(NF κ B)信号通路活化对肝癌细胞增殖的影响与分子机制.方法 给予雄性Sprague-Dawly大鼠0.05％的2乙酰氨基芴以制备肝癌模型;收集肝病患者外周血,分离血清和有核细胞;培养肝癌细胞HepG2,以TNFα抗体下调TNFα或以NF-κ B/p65siRNA干扰NF-κB基因转录.定量PCR检测NF κBmRNA,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-异硫氰酸/碘化丙啶双色标记法分析细胞凋亡,以Western blot或酶联免疫吸附法分析TNFα和NF-κB浓度.计量资料采用t检验、方差分析;计数资料以x2检验或Fisher确切概率法分析.结果 肝细胞恶性转化时TNF α/NF-κB信号通路中关键分子TNFα与NF-κB呈进行性升高,其水平与肝脏病理学改变呈正相关;从良性肝病进展到肝癌过程中,两者呈进行性升高趋势.HepG2细胞中加入TNF α抗体(5mg/L)后,细胞凋亡率(21.45％±4.07％)明显上升,显著高于对照组(5.63％±0.93％,q=10.07,P＜0.01);细胞增殖阻滞在G0／G1期,其比例(66.23％±1.29％)明显高于对照组(59.00％±1.02％,q=10.98,P＜0.01);且培养液中TNF α和NF-κB表达水平均显著下调(r=0.89,P＜0.01);抑制肝癌细胞效应与抗TNFα浓度呈剂量依赖性.肝癌细胞NF-κB高表达,显著高于L02细胞,以p65 siRNA(100 nmol/L)干预后,NF-κB在mRNA或蛋白水平分别下降93％或62％,且85％癌细胞发生凋亡.结论 干预TNFα/NF-κB信号通路活化,可经促凋亡和细胞周期阻滞机制抑制肝癌细胞增殖.
- 顾星姚敏王司晔时运董志珍邱历伟姚登福
- 关键词：肿瘤坏死因子NF-ΚB增殖抑制
- 肝癌细胞多药耐药逆转技术新进展
- 2014年
- 肝细胞肝癌（HCC）以手术治疗为主,辅之化学治疗、局部治疗等.早期肝癌可选择切除术及肝脏移植,但大部分患者就诊时已失去手术治疗机会[1].尽管新化学治疗药物与方案不断涌现,其效果仍不佳,原因是肝癌存在多药耐药（multidrug resistance,MDR）.药物作用于癌细胞后,其胞内结构、信号通路与调控机制等改变,产生耐药,对药物敏感性降低甚至消失.MDR机制复杂,如细胞表面转运蛋白过表达、凋亡基因失调、酶活性改变等,致化学治疗失败.针对肝癌MDR的逆转方法较多,可降低肝癌MDR,增强化学治疗药物疗效.本文综述了肝癌MDR机制与逆转方法的研究进展.
- 时运姚敏姚登福
