张亚坤
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的原核表达
- 2012年
- 为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体。利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列,预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位,在线分析囊膜基因原核表达稀有密码子,根据分析结果选取囊膜蛋白的两段基因分别表达,命名为env-1和env-2。以本实验室构建好的pCDNA3.
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白原核表达密码子扩增片段克隆技术
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测被引量：3
- 2013年
- 利用生物信息学预测绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)NM株囊膜蛋白优势抗原表位,为寻找用于绵羊肺腺瘤病诊断和预防的候选抗原表位提供参考。参照OPAV-NM株env基因序列(登录号:JQ837489),应用Gamier-Robson方法、SOPMA方法和网络服务器PSIPRED、Predictprotein预测OPAV-NM株囊膜蛋白的二级结构。用Kyte-Doolittle方法预测蛋白质的疏水区和亲水区,用Emini方法预测蛋白质表面可能性,以Jamson-Wolf方法预测蛋白的抗原指数,利用Bcepred、IEDB、ABCpred网络服务器预测囊膜蛋白的抗原性,然后综合评价囊膜蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,囊膜蛋白(ENV)二级结构丰富,α螺旋和β折叠所占比例相对较多,也具有多处转角及无规则卷曲区域,提示OPAV-NM囊膜蛋白具有较多的优势抗原表位区段。这些优势抗原表位分别为第52～76,101～110,118～165,182～196,201～215,281～305,309～332,335～356,461～476,530～574位氨基酸,其中第461～476位和第530～574位的部分氨基酸序列位于胞外区,且第530～574区段位于en-OPAV和ex-OPAV的囊膜氨基酸序列的差异区,该段氨基酸序列对绵羊肺腺瘤病毒疫苗和诊断方法的研究有重要意义。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白B细胞表位
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白B细胞抗原表位预测
- 2012年
- 为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推导的氨基酸序列,与绵羊肺腺瘤病毒代表株JSRV21(AF105220)和JSRVJS7(AF357971.1)的囊膜蛋白氨基酸序列比较同源性均为99.5%。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病B细胞抗原表位NM囊膜蛋白GENBANK
- 靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定被引量：6
- 2013年
- 为探讨绵羊内源性反转录病毒(enJSRV)在绵羊胚胎发育过程中的作用,利用脂质体将pEGFP-C1空载体转入绵羊绒毛膜滋养层细胞中,测定其转染效率。同时构建抑制enJSRV env基因的RNA干扰质粒,并将其转染到能稳定表达enJSRV env基因的绵羊绒毛膜滋养层细胞中,通过荧光定量PCR检测其干扰效率。结果显示,重组干扰质粒enJRSV-env-shRNA-1、enJRSV-env-shRNA-2、enJRSV-env-shRNA-3、enJRSV-env-shRNA-4、Negative-shRNA构建成功。Lipofectamine LTX脂质体体积为6.0μL,转染混合物体积为100μL,转染48h组的转染效率最高,为42.37%。与正常对照组细胞的enJSRV-env mRNA表达量相比,转染靶基因干扰质粒的各组绵羊绒毛膜滋养层细胞中enJSRV-env mRNA表达量分别下调了73.56%、66.82%、33.66%和18.16%。筛选出了一个干扰效率最高的RNA干扰质粒enJRSV-env-shR-NA-1,为以后包装慢病毒及进行动物试验来揭示enJSRV的生殖生物学作用奠定了坚实的基础。
- 张宇飞刘月张亚坤刘淑英
- 关键词：滋养层细胞内源性绵羊肺腺瘤病毒
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白致癌作用的研究进展被引量：9
- 2012年
- 综述了绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)的囊膜蛋白(envelope protein,Env)在致癌过程中的重要作用以及在JSRV致癌转化细胞时,PI3K-Akt-mTOR和Ras-Raf-MEK-MAPK这两个主要细胞信号转导通路,以期为JSRV和人肺癌的相关研究提供参考。
- 张亚坤刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白致癌基因信号转导
- pcDNA_(3.1)(+)/exJSRV-env重组质粒的构建及其瞬时转染293T细胞被引量：1
- 2012年
- 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus,exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原。JSRV具有相互重叠的gag、pro、pol、env的反转录病毒典型的基因结构,其中env基因编码病毒的囊膜蛋白(ENV),ENV主要负责病毒粒子与病毒的靶细胞的特异性结合,同时发生膜融合使病毒粒子侵入靶细胞内。
- 张宇飞刘月张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病瞬时转染反转录病毒重组质粒
