傅德智
- 作品数：24 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国科学院亚热带农业生态研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 禽流感H5N1型神经氨酸酶在细胞中的表达
- 2010年
- 利用表达载体pIRES-NA研究H5N1型神经氨酸酶(neuramidinase,NA)基因在NIH-3T3细胞中表达,为今后转基因家禽的培育提供证据。通过构建重组表达载体转染细胞经G418筛选后,利用PCR方法检测NA基因在细胞基因组中整合,利用RT-PCR和Western Blotting的方法分别在RNA及蛋白质水平上检测NA基因在细胞中表达。结果表明细胞转染经筛选后,提取细胞基因组进行PCR,能扩增出NA基因片段,约1.4kb;同时RT-PCR能检测到NA基因mRNA,Western Blotting能检测到细胞表达约55ku NA蛋白,构建重组载体能整合到NIH-3T3细胞基因组中,NA基因能在细胞中表达。
- 丁爱军任丽伟傅德智李碧春
- 关键词：H5N1神经氨酸酶
- 体外重组神经氨酸酶的表达及其亚细胞定位研究
- 2011年
- 研究神经氨酸酶(NA)基因在体外培养NIH-3T3细胞中的表达定位。实验构建了真核表达载体pcDNA3.0/EGFP-NA与pcDNA3.0-NA,采用聚乙烯亚胺介导基因转染法,分别转染NIH-3T3细胞,转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察,并分别用RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)进一步检测。结果表明:成功构建了EGFP-NA融合蛋白的表达载体;RT-PCR检测到EGFP-NA融合蛋白的表达;NIH-3T3细胞EGFP标记观察显示绿色荧光分布在胞质近胞膜,细胞核内无绿色荧光;间接免疫荧光鉴定显示,绿色荧光分布在细胞膜内外,表达的重组NA蛋白定位在细胞膜上。
- 任丽伟丁爱军傅德智李碧春
- 关键词：绿色荧光蛋白重组质粒
- 以游离脂肪酸为结合配体的GPCRs的研究进展被引量：4
- 2011年
- 食物营养成分在肠道中可被分解产生游离脂肪酸.游离脂肪酸除了被吸收氧化分解产生能量供机体利用外,还能通过结合脂肪酸受体激活信号通路,参与多种生理功能的调节,如维持能量平衡、代谢稳态、调节脂质形成与分解、影响机体免疫、结识流动消化成分间接监测菌群数量等.被确认的游离脂肪酸受体包括结合长链脂肪酸的G蛋白偶联受体(GPR)120,结合中链脂肪酸的GPR84,结合短链脂肪酸的GPR41及GPR43.对这些脂肪酸受体的研究可进一步了解肠道脂肪酸的消化与吸收、机体能量平衡与脂质代谢,对增强肠道营养、调节机体免疫和开发针对脂质代谢紊乱疾病的药物有着重要意义.
- 冯泽猛伍力张珍珍傅德智周栋唐志如印遇龙
- 关键词：游离脂肪酸脂肪代谢G蛋白偶联受体
- 大豆寡糖对断奶环江香猪生长性能和营养物质代谢的影响被引量：10
- 2012年
- 为了探讨大豆寡糖(SBOS)作为抗生素替代物对断奶仔猪生长性能的影响及其作用机制,饲养试验选用21日龄断奶的环江香猪12头,随机分为2组,每组6头,分别饲喂添加0.5%SBOS日粮和抗生素对照日粮,试验期为14 d。记录每天的采食量,分别于试验开始和结束时称取空腹体重并采集血液,肝素抗凝离心分离血浆,测定生化参数和游离氨基酸水平。消化试验选用10头环江香猪,随机分为2组,处理同饲养试验。预试期4 d,正试期3 d,收集粪样,指示剂法测定干物质、粗蛋白和粗脂肪的消化率。结果表明,与抗生素对照组相比,SBOS组仔猪平均日采食量、日增重和料重比均无显著变化;血浆尿素氮和血氨含量显著下降,总蛋白含量显著升高(P<0.05);血浆甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和蛋氨酸的含量均显著升高(P<0.05);粗蛋白和粗脂肪消化率有提高趋势。提示SBOS可替代抗生素用于断奶仔猪日粮。
- 周笑犁傅德智孔祥峰宋小燕耿梅梅印遇龙
- 关键词：大豆寡糖血液生化指标营养物质代谢
- 体内精原干细胞介导法制备抗病转基因鸡被引量：1
- 2011年
- 实验旨在利用精原干细胞介导的方法体内转染融合基因EGFP-MMx,制备抗病毒性疾病转基因鸡。采用脂质体包埋法,睾丸内注射EGFP-MMx融合基因,术后采集30、40、50、60、70、80 d睾丸组织进行冰冻切片、基因组PC R、点杂交实验,转染后60 d公鸡精液人工授精于正常母鸡,对后代血液采用PC R检测技术、R T-PC R和W estern blot方法检测外源基因EGFP-MMx的整合表达情况。结果表明:睾丸基因组点杂交阳性率为72.2%。通过PC R、R T-PCR检测方法,在实验公鸡精液和F1代血液中检测到目的基因,精液阳性率为25%,F1代阳性率为10.53%,Western blot检测F1代阳性率为7.89%。结果证明外源基因通过睾丸注射法可整合到基因组上,为培育抗病转基因鸡提供参考依据。
- 孙敏施青青阴彦辉傅德智秦玉蓉许峰李碧春
- 关键词：精原干细胞转基因鸡
- 藏猪兴奋性氨基酸转运载体EAAC1基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2011年
- 兴奋性氨基酸转运载体EAAC1是肠道内谷氨酸的主要载体。本研究根据人的基因编码区设计一对特异性引物,以藏猪空肠总RNA为模板,通过RT-PCR获得一长约1600 bp的cDNA片段,T/A克隆后测序,并进行序列分析;将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。测序结果显示,获得的cDNA全长为1575 bp,编码524个氨基酸;EAAC1分子量为57 kD,等电点为5.34,GenBank登录号为GQ375513;该蛋白质具有3个N-糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点和1个cAMP/cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,含有7个跨膜结构域和一个信号肽序列;SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白质与预期蛋白质大小一致。上述结果为进一步研究EAAC1的功能及其调控奠定了基础。
- 傅德智孔祥峰杨焕胜褚武英李铁军印遇龙
- 关键词：藏猪原核表达
- IUGR对不同日龄哺乳环江香猪肠道ASCT2表达的影响
- 胎儿的生长发育是一个复杂的生物学过程,受遗传、环境、母体成熟程度和其它因素的影响。宫内生长迟缓(intrauterine growtth retardation,IUGR)是指哺乳动物的胚胎或胎儿及其器官在母体妊娠期间的...
- 傅德智印遇龙孔祥峰王文策杨焕胜耿梅梅宋小燕何庆华
- 关键词：环江香猪不同日龄
- 文献传递
- 大豆寡糖对断奶环江香猪生长性能和生化参数的影响
- 我国小型猪的基础研究较为薄弱,国内外均缺乏相应标准可以参照,这在很大程度上影响了小型猪的标准化进展。环江香猪是我国著名的小型地方猪种,可作为研究人类疾病的理想动物模型。鉴于环江香猪的饲养管理仍较为粗放,从而导致日粮中营养...
- 周笑犁傅德智孔祥峰宋小燕耿梅梅阮征印遇龙
- 关键词：环江香猪生化参数大豆寡糖
- 文献传递
- 睾丸注射Mx基因生产抗病转基因鸡初探被引量：7
- 2010年
- 采用脂质体转染法,将线性化pcDNA3.0-MMx质粒随机打点注射入18周龄青年公鸡睾丸内,术后观察公鸡日常活动、常规检测精子;采集转染后25、50、75 d公鸡精液,并于转染70 d后人工采精,授精于正常母鸡,产生F1后代,采用常规PCR检测技术,检测证实外源Mx基因的整合情况,探讨外源Mx基因在鸡体内稳定整合和遗传的能力。结果表明:手术法转染外源基因过程对公鸡的生殖功能未造成明显影响;PCR检测证实外源Mx基因已整合到精子基因组,且能通过体外受精传递给后代,后代PCR检测的阳性率为27.27%(6/22)。证明外源Mx基因能稳定整合到基因组上,睾丸内注射法可能是一种切实可行、易于推广的制备抗病转基因鸡的方法。
- 孙敏倪黎刚施青青阴彦辉傅德智高波李碧春
- 关键词：MX蛋白转基因鸡
- 鸡ES细胞体外定向诱导分化特性的研究被引量：1
- 2011年
- 旨在探索鸡胚胎干细胞(ES细胞)体外定向诱导的多向分化潜能。分离鸡X期胚盘细胞,体外培养传代,经鉴定后,采用地塞米松(DEX)、β-甘油磷酸钠(β-GP)和维生素C(VitC)诱导ES细胞向成骨细胞分化;采用维甲酸(RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导ES细胞向神经元样细胞分化;采用DEX、胰岛素、IBMX诱导ES细胞向脂肪细胞分化,比较不同浓度组合诱导剂的诱导效果,分别用Von Kossa’s染色法、甲苯胺蓝染色法、免疫组化法、油红O染色法和RT-PCR鉴定诱导产生的细胞。结果显示,ES细胞被诱导3～21d后,分化为成骨细胞,诱导率为40%～72%;被诱导4～7d后,分化为神经元样细胞,诱导率为71%～84%;被诱导2～21d后,分化为脂肪细胞,油红O染色阳性,并表达PPARγ基因。结果表明,在体外条件下,ES细胞可被特异的化学物质定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能。
- 李碧春陈香凝裴敬帅施青青傅德智阴彦辉张振韬窦套存王克华
- 关键词：胚胎干细胞体外培养诱导分化
