邵国军
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组BMP-4/7融合基因腺相关病毒的构建及其对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响
- 目的应用重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体(AAV-BMP-4/7)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响。方法1采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP-4和B...
- 袁绍辉尚剑邵国军刘玉耆博超刚
- 关键词：生物学行为
- 青年重度颈椎黄韧带骨化1例
- 2008年
- 付春江毕郑钢邵国军
- 关键词：皮肤感觉异常双下肢无力颈部活动受限病理反射二便障碍
- 转基因骨髓基质细胞修复骨缺损被引量：1
- 2008年
- 背景：转基因细胞移植可以提高成骨细胞数量及成骨活性，有可能成为骨缺损的重要修复方法。目的：构建人骨形态发生蛋白2真核表达载体，鉴定并转染兔骨髓基质细胞，应用基因治疗的方法修复兔桡骨缺损，观察其成骨效果。设计、时间及地点：单一样本观察及同体对照动物实验，于2004-06/2006-02在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料：克隆质粒psp-65BMP2为解放军第四军医大学171腔医院惠赠；pcDNA3．1表达载体购自Invitrogen公司；清洁级新西兰白兔32只，雌雄不限，体质量为2～2．5kg。方法：双酶切克隆载体将骨形态发生蛋白2目的基因与真核表达载体pcDNA3．1连接。将自体骨髓基质细胞修复兔桡骨缺损。分别于16只新西兰白兔缺损处植入载有转基因细胞的胶原，对侧植入单纯胶原对照。16只新西兰白兔缺损处植入载有自体细胞的胶原，对侧植入单纯胶原对照。主要观察指标：①免疫组织化学及Western blotting检测转染骨形态发生蛋白2基因骨髓基质细胞的表达效果。②术后12周麻醉后处死动物，行缺损处大体观察、X射线观察及组织学和电镜观察。结果：①成功构建骨形态发生蛋白2真核表达载体，转染骨髓基质细胞后，免疫组织化学染色，可在骨髓基质细胞胞浆显示棕色阳性染色：Western blotting检测有针对骨形态发生蛋白2抗体的蛋白条带，证实骨形态发生蛋白2表达。②组织学和电镜观察实验侧骨缺损处可见大量成骨细胞及新生基质。对照侧仅在断端间见少量骨细胞，断端处为纤维组织充填：转基因骨髓基质细胞修复骨缺损完全愈合：大体及X射线观察转染实验侧有连续骨痂通过骨缺损处，对照侧无连续骨痂通过断端。结论：骨髓基质细胞经基因转染后可以表达骨形态发生蛋白2，并可以修复骨缺损。
- 付春江毕郑钢杨成林张军邵国军
- 关键词：骨形态发生蛋白质类转染
- 融合基因骨形态发生蛋白-4／7重组腺相关病毒载体转染对骨髓基质干细胞成骨活性的作用被引量：3
- 2008年
- 目的应用高效细菌内同源重组系统pAd-Easy制备融合基因骨形态发生蛋白-4／7（BMP-4／7）基因的重组腺相关病毒（AAV），转染兔骨髓基质干细胞（BMSCs），检测BMP-4／7的成骨活性。方法采用RT-PCR一步法和基因重组法，从胎盘组织中克隆BMP．4和BMP-7成熟肽cDNA，获取BMP-4／7融合基因，克隆到pGEM质粒中；从pGEM-BMP-4／7质粒中切取BMP-4／7融合基因克隆到穿梭载体，在大肠杆菌内重组，在293细胞中构建AAV—BMP-4／7重组腺相关病毒载体；采用SDS—PAGE电泳检测BM-4／7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达；采用ELISA法检测融合基因BMP-4／7在BMSCs中的表达。AAV-BMP4／7转染兔BMSCs细胞7、14d后，行碱性磷酸酶及骨钙素含量测定，观察成骨活性，以非转染组作为对照。结果成功构建高滴度的携带BMP4／7融合基因的重组腺相关病毒AAV-BMP4／7。AAV-BMP-4／7重组质粒载体转化大肠杆菌进行诱导表达，SDS—PAGE电泳可见29～30KD蛋白带，大多数蛋白存在于包涵体内。ELISA检测显示经AAV转染的BMSCs中BMP-4／7蛋白有表达，随着转染MOI值的增加，BMP4／7蛋白的表达增高（P〈0．01）。AAV．BMP-4／7转染细胞后，碱性磷酸酶及骨钙素含量均明显增高，并与转染后诱导培养的时间呈正相关，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论融合基因BMP4／7可提高BMPs表达水平，有成骨活性，通过AAV可稳定表达。
- 袁绍辉尚剑邵国军毕郑钢
- 关键词：骨形态发生蛋白
- 重组BMP_(4/7)融合基因腺相关病毒的构建及其对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响被引量：8
- 2008年
- [目的]应用重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体(AAV BMP4/7)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响。[方法](1)采用RT-PCR一步法和基因重组法,从胎盘组织中克隆BMP4和BMP7成熟肽cDNA,获取BMP4/7融合基因,克隆到质粒pGEM质粒中;(2)从pGEM-BMP4/7质粒中切取BMP4/7融合基因克隆到穿梭质粒,在大肠杆菌内重组,在293细胞中构建AAV-BMP4/7重组腺相关病毒载体;(3)不同MOI值的AAV-BMP4/7转染兔BMSCs,观察细胞形态学变化,MTT法描记细胞生物曲线,观察对细胞增殖的影响,以AAV-EDFP做对照;(4)AAV-BMP4/7转染兔BMSCs细胞7、14d后,行ALP及OC含量测定,观察成骨活性,以AAV-EDFP做对照。[结果](1)成功构建高滴度的携带BMP4/7融合基因的重组腺相关病毒AAV-BMP4/7;(2)AAV-BMP4/7转染BMSCs细胞后,细胞增殖活性良好,转染效率为72%,细胞形态呈典型的成骨改变,1×105vg/cell的MOI值对细胞形态影响较小,而转染效率强于5×104vg/cell(59.38%)。(3)AAV-BMP4/7转染细胞后,ALP、OC含量均明显增高,并与转染后诱导培养的时间呈正相关,与对照组比较差异统计学意义(tALP=896.88P<0.001tOC=543.24P<0.01)。[结论]AAV-BMP4/7融合基因转染效率高,对BMSCs细胞有明显的诱导成骨活性,对骨愈合的基因治疗提供了新的思路和途径。
- 袁绍辉尚剑邵国军刘玉耆博超刚
- 关键词：骨组织工程骨形成蛋白融合基因腺相关病毒骨髓基质干细胞
