李德元
- 作品数：12 被引量：37H指数：3
- 供职机构：河南科技大学更多>>
- 发文基金：河南省高校青年骨干教师资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一种抑制小鼠B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用
- 本发明公开了一种抑制小鼠B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明根据小鼠B淋巴细胞CD86 mRNA序列设计并合成小分子干扰RNA(序列如SEQ ID NO:1～2所示)，该CD86...
- 王臣张聪张巫凡杨静牛明福李德元
- 文献传递
- 法氏囊五肽的分离鉴定及其免疫调节和抗过氧化应激机理的研究
- 法氏囊是禽类特有的中枢免疫器官,是B细胞分化发育和成熟的场所。法氏囊超滤液(1KDa以下)含有许多生物活性物质,特别是一些小肽不仅对禽类具有免疫调节功能,而且对哺乳动物及人类淋巴细胞也有明显的免疫学及生理学活性。近年来,...
- 李德元
- 关键词：分离纯化免疫调节抗氧化禽流感灭活疫苗
- 重组融合肽Tβ4-BP5基因的克隆、表达及其免疫佐剂特性被引量：1
- 2015年
- 胸腺肽Tβ4和法氏囊活性五肽BP5均能够调节机体的免疫反应,为探讨重组融合肽Tβ4-BP5是否也与免疫功能相关,本试验按照大肠杆菌偏嗜密码子设计并合成重组融合肽Tβ4-BP5基因,将其克隆至pET-32α表达载体中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达。为进一步评价重组融合肽Tβ4-BP5的免疫佐剂特性,以Tβ4-BP5联合灭活H9N2型AIV疫苗免疫鸡,检测免疫后鸡的HI抗体效价、抗原特异性IgG抗体、AIV中和抗体效价及Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,并通过动物免疫保护试验来评价其对鸡的免疫保护作用。结果显示,重组融合肽Tβ4-BP5在大肠杆菌中获得表达;Tβ4-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、特异性IgG抗体水平、促进AIV中和抗体的产生、提高Th1型(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)的分泌水平,表明Tβ4-BP5既能增强机体体液免疫应答,又能增强细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示Tβ4-BP5有助于鸡肺脏中H9N2型AIV病毒的清除。以上结果提示,重组融合肽Tβ4-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。
- 王臣郭香玲李小康李德元陈溥言
- 关键词：融合基因
- 法氏囊活性五肽BP5的抗肿瘤作用被引量：2
- 2015年
- 【目的】法氏囊活性五肽Bursopentin(BP5)是一种多功能生物学活性因子,不仅具有免疫调节和抗氧化功能,还具有抗肿瘤活性。目前,BP5发挥抗肿瘤生物功能的作用机制尚不清晰。【方法】本研究利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库,以BP5-BSA为靶分子对文库进行亲和淘选,通过序列测定和生物信息学分析,获得BP5的结合蛋白。通过分析BP5诱导的鸡DT40细胞mRNA基因表达谱和检测BP5对HCT116细胞中p53 Luciferase活性和p53信号通路中相关蛋白表达的影响来探讨BP5抗肿瘤的作用机制。【结果】构建的鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库原始滴度为1.2×104pfu/m L,重组率为91.7%,扩增后滴度为1.9×109pfu/m L;通过生物淘选获得3条与BP5结合的鸡源蛋白血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和运输蛋白颗粒复合体2(trafficking protein particle complex 2)。基因表达谱分析结果显示,BP5参与调节多条与抗肿瘤功能有关的通路,其中包括p53信号通路,且p53信号通路涉及的5个差异表达基因均与细胞周期调控或抗肿瘤相关,其中SIAH1、TP53(p53)、CIP1(p21)基因被上调,CHEK2、CCNE1基因被下调。RT-PCR方法检测10个表达水平有明显变化的差异基因,其结果与基因芯片分析结果相符;BP5对p53 Luciferase活性的影响实验结果显示,BP5在0.2-20μg/m L浓度下能够明显提高HCT116细胞中p53相对Luciferase活性,Western blotting结果证实,BP5能显著促进p53、p21蛋白的表达水平,而CCNE1和CHEK2蛋白的表达水平则明显降低。【结论】本研究结果表明BP5通过p53信号通路途径发挥其抗肿瘤生物学功能,为进一步研究BP5抗肿瘤具体的分子机制提供了参考依据。
- 郭香玲王臣李小康吴庭才李德元陈溥言
- 关键词：DNA文库相互作用蛋白抗肿瘤
- 天蚕素类抗菌肽CLP的设计及其活性测定被引量：7
- 2016年
- 为设计研发新型天蚕素类抗菌肽（Cecropin-like antibacterial peptide,CLP）,本研究参照抗菌肽Cecropin P1的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成CLP,并分别测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,新型CLP对金黄色葡萄球菌（ATCC29213）、禽多杀性巴氏杆菌（CVCC474）、鸡白痢沙门氏菌（ATCC10398）、鸡致病性大肠杆菌O1均具有良好的抑菌活性,对这4种细菌的最小抑菌浓度（MIC）分别为6.25μg/mL、1.56μg/mL、3.12μg/mL和6.25μg/mL。酸稳定性试验显示,新型CLP在pH值为6-8时活性最高,热稳定性试验显示新型CLP于100℃加热2 h后仍具有抑菌活性。在对鸡白痢沙门氏菌感染雏鸡的体内疗效试验中,新型CLP显示了良好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的天蚕素类抗菌肽提供了参考数据。
- 王臣张巫凡牛明福郭香玲李德元陈溥言
- 关键词：抗菌肽CECROPINP1
- 重组免疫融合肽Tα1-BP5的表达及其免疫佐剂特性研究被引量：2
- 2016年
- 胸腺素α1(Tα1)和法氏囊活性五肽(BP5)均具有重要的免疫学功能,但二者在蛋白水平上的联合应用尚未见报道。为探究重组表达融合肽Tα1-BP5(r Tα1-BP5)是否具有免疫佐剂特性,本实验设计合成融合肽Tα1-BP5基因,将其克隆至p ET-32a中进行原核表达,并采用MTT法检测其体外活性。同时以rTα1-BP5联合H9N2型禽流感病毒(AIV)灭活疫苗免疫小鼠,检测免疫后小鼠的HI抗体、IgG抗体亚型和细胞因子(IL-4和IFN-γ)的分泌水平,并通过攻毒试验评价其对小鼠的免疫保护作用。结果显示,rTα1-BP5在大肠杆菌中获得可溶性表达;rTα1-BP5能够增强机体免疫后HI抗体、平衡IgG1和IgG2a抗体、提高Th2型(IFN-γ)和Th1(IL-4)型细胞因子的分泌水平,表明rTα1-BP5能够同时增强机体体液和细胞免疫应答。动物免疫保护试验结果显示rTα1-BP5有助于鼠肺脏中H9N2型AIV的清除。以上结果提示,rTα1-BP5具有良好的免疫佐剂的潜能。本研究为新型疫苗佐剂的研究开发奠定了基础。
- 王臣张巫凡杨静郭香玲李德元陈溥言
- 关键词：免疫佐剂
- 鸡新城疫强毒株的分离及其人工感染试验被引量：25
- 2002年
- 采用鸡胚接种法从安徽凤阳某患病鸡群中分离到一株病毒 ,经HA、HI试验及血清中和接种鸡胚试验 ,确定为新城疫病毒。参照国际上规定的新城疫病毒毒力判定的标准及其方法 ,测定该分离株的鸡胚最小致死量平均死亡时间 (MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数 (ICPI)和 6周龄鸡静脉内接种致病指数 (IVPI)分别为 4 4h、1.74和 2 .39。表明该分离株具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力 ,属强毒力毒株。用该分离株对 16日龄的鸡、鹅、鸭分别进行了人工试验感染 ,其发病率均为10 0 % ,而死亡率分别为 4 0 %～ 80 %、4 0 %～ 6 0 %和 0。
- 张训海朱鸿飞周功强王旋黄福林李德元
- 关键词：新城疫病毒病毒分离鸡胚接种毒株
- 法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定被引量：3
- 2014年
- 为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆。测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM。通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2μg/m L^20μg/m L浓度下,P6-12肽在2μg/m L^20μg/m L浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20μg/m L浓度下抑制作用最为显著(p<0.01)。此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性。以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性。本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据。
- 王臣郭香玲李小康汪洋张春杰吴庭才李德元陈溥言
- 关键词：法氏囊噬菌体随机肽库抗肿瘤结合肽
- 一种抑制鸡B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用
- 本发明公开了一种抑制鸡B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明根据鸡B淋巴细胞CD86mRNA序列设计并合成小分子干扰RNA(序列如SEQ ID NO:1～2所示)，该CD86siR...
- 廖成水王臣张聪张巫凡牛明媚杨静李德元李小康张春杰
- 文献传递
- 一种抑制鸡B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用
- 本发明公开了一种抑制鸡B淋巴细胞CD86基因表达的siRNA及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明根据鸡B淋巴细胞CD86mRNA序列设计并合成小分子干扰RNA(序列如SEQ？ID？NO:1～2所示)，该CD86siR...
- 廖成水王臣张聪张巫凡牛明媚杨静李德元李小康张春杰
- 文献传递
