张永正
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 鸡AvBD9毕赤酵母组成型高效表达及其条件优化
- 禽β-防御素9成熟肽(AvBD9)是由41个氨基酸组成的富含半胱氨酸的阳离子小肽,在鸡体的先天性免疫和获得性免疫中起着重要作用。它在消化道广泛表达,且具有较强的抗菌活性。又因其抗菌谱广、无残留及不使病菌产生抗性等特点,有...
- 张永正
- 关键词：毕赤酵母组成型表达抗菌活性
- 文献传递
- 动物源性大肠杆菌ESBLs类耐药基因与HPI基因的双重PCR检测及相关性分析被引量：6
- 2013年
- 为研究大肠杆菌ESBLs类耐药基因和HPI基因在环境中的污染状况及相关性,采用双重PCR对大肠杆菌中HPI基因irp1、irp2、fyuA和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因TEM、SHV进行了检测分析,选择irp2缺失株对两类基因的相关性进行了分析。37株大肠杆菌的检测结果显示,TEM、SHV耐药基因的阳性率分别为94.5%、56.8%;irp1+TEM、irp1+SHV、irp2+TEM、irp2+SHV、fyuA+TEM、fyuA+SHV基因的阳性率分别为13.5%、13.5%、21.6%、21.6%、16.2%、16.2%。从大肠杆菌中扩增出118、132、799、414、948bp的特异性目的条带,而从甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌中则不能扩增出上述特异性条带。灵敏度试验表明,该反应体系的检测灵敏度为1.5×103 CFU/mL。irp2缺失株试验表明,irp2中仍能检测出TEM、SHV基因。上述结果表明,采用双重PCR能特异地从大肠杆菌中检测出β-内酰胺类耐药基因和HPI基因,且两类基因间无明显相关性。
- 陈伟张永正汪雪雁薛秀恒涂健祁克宗
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶双重PCR
- 毕赤酵母组成型表达载体的构建及报告蛋白表达评价被引量：2
- 2013年
- 目的构建毕赤酵母(Pichia pastoris)组成型分泌表达载体,并表达报告蛋白葡萄球菌核酸酶(staphylococcus nuclease,SNase,NucA),以评价其表达外源蛋白的能力。方法从巴斯德毕赤酵母GS115基因组中PCR扩增毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase promoter,pGAP)片段,克隆至载体pPIC9K中,构建组成型分泌表达载体pGHKα;从金黄色葡萄球菌基因组中PCR扩增编码报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的序列nucA,克隆至载体pGHKα中,构建重组表达质粒pGHKα-nucA,经SacⅠ和BglⅡ依次酶切线性化后,电转化至毕赤酵母GS115中;PCR及TB-D平板法筛选阳性重组酵母菌;Tricine-SDS-PAGE检测表达产物;琼脂扩散法检测重组酵母菌表达上清液的核酸酶活性。结果组成型分泌表达载体pGHKα经PCR鉴定,证明构建正确;重组表达质粒pGHKα-nucA经PCR及测序鉴定,证明nucA基因片段正确插入载体pGHKα中;重组酵母菌GS115/pGHKα-nucA经PCR及TB-D平板法检测证明构建成功;表达的目的蛋白相对分子质量约为17 000,表达量约占上清总蛋白的42%,且具有显著的核酸酶活性。结论成功构建了毕赤酵母组成型分泌表达载体pGHKα,其能正确表达报告蛋白NucA,且表达的蛋白能分泌到细胞外,表达效率高,为异源蛋白在毕赤酵母中的安全高效表达奠定了基础。
- 张永正温俊柳王燕魏海婷涂健祁克宗
- 关键词：毕赤酵母组成型表达葡萄球菌核酸酶
- 鸡β-防御素9酵母工程菌制备及其表达方法
- 本发明公开了鸡β-防御素9酵母工程菌制备及表达方法，属于生物技术及基因工程制药技术领域。首先利用毕赤酵母惯用密码子优化鸡β-防御素9基因，在其前端添加Kex2酶切位点编码序列并人工合成该基因，然后将合成的β-防御素9基因...
- 祁克宗涂健张永正彭开松周秀红汪雪雁刘红梅张明陈玎玎付瑞燕薛秀恒
- 文献传递
