刘馨 作品数:28 被引量:57 H指数:5 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 云南省应用基础研究计划面上项目 云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
胰酶浓度对轮状病毒蚀斑形成的影响 被引量:4 2008年 轮状病毒属于呼肠孤病毒属(reovirus),是世界范围内导致婴幼儿急性肠炎的主要病原。由于轮状病毒存在众多的血清型,且其基因可重排产生新的基因型,所以在研究过程中保持毒株的纯净十分重要。病毒粒子单克隆的筛选是病毒分子遗传和疫苗毒株研究中一项基本和基础的工作,其中蚀斑实验是非常理想的方法,同时也是轮状病毒滴度测定较为客观和准确的方法。但是,轮状病毒蚀斑形成受毒株、细胞的影响,相关试剂特别是胰酶(pancreatin)的浓度,对实验的稳定性及结果判定影响较大。为此,笔者观察了不同浓度胰酶对轮状病毒蚀斑形成的影响,对胰酶浓度进行优选,以期建立稳定的轮状病毒蚀斑实验方法。 刘馨关键词:轮状病毒属 胰酶 呼肠孤病毒 急性肠炎 一种轮状病毒灭活疫苗的制备方法 本发明公开了一种轮状病毒灭活疫苗的制备方法。该方法使轮状病毒株G1,G2,G3,G4适应至人二倍体细胞系,并在人二倍体细胞系上高效繁殖,将制得的轮状病毒作为轮状病毒灭活疫苗的生产毒株。其中,所述的人二倍体细胞系为KMB1... 刘馨 孙茂盛文献传递 恒河猴SV40检测方法的建立及病毒基因和血清分析 侯宗柳 刘建生 刘馨 任丽虹 李琦涵 由于脊髓灰质炎减毒活疫苗的使用,使我国消灭了脊髓灰质炎,而恒河猴肾组织是脊髓灰质炎减毒活疫苗生产的细胞基质,故恒河猴的质量对生产用细胞影响较大。由于恒河猴是SV40的易感宿主,尤其是在群体笼养的条件下,猴群间可相互传播,...关键词:关键词:恒河猴 病毒基因 SV40树突状细胞疫苗的制备及免疫效应研究 目的:建立外周血来源的猴树突状细胞体外培养扩增、诱导及鉴定的方法,制备SV40树突状细胞疫苗并对其免疫效应进行评价。方法:使用rhGM-CSF扩增猴单核细胞,使用rhIL-4诱导单核细胞向树突状细胞方向分化,使用SV40... 葛长勇 易山 李鸿钧 张光明 刘馨 奎翔 孙茂盛关键词:SV40 树突状细胞疫苗 免疫效应 文献传递 猴血SV40抗体和SV40 DNA携带关系分析 2003年 目的 检测 5 7份恒河猴血清及对应的猴血中抗SV4 0抗体、SV4 0DNA的携带情况 ,找出抗体滴度与DNA携带的相关关系。方法 用间接免疫荧光法检测猴血中SV4 0中和抗体 ,聚合酶链反应 (PCR)法检测SV4 0st抗原DNA的携带情况。结果 5 7份猴血清中 ,SV4 0抗体阳性率为 93% (5 3 5 7) ,抗体滴度最高为 1∶12 80 ,最低为 1∶10 ,GMT为 15 9.5 6 ,PCR检测猴血淋巴细胞SV4 0DNA阳性率为 2 4 .5 6 % (14 5 7) ,当抗体为 1 80以下时 ,病毒整合于血细胞 ,1∶80以上时 ,对st抗原基因的整合有抑制作用。结论 恒河猴SV4 刘馨 刘建生 徐冬蕾 崔萍芳 王庆龄 侯宗柳关键词:SV40 抗体 DNA 聚合酶链反应 荧光抗体技术 肿瘤病毒 甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达 被引量:1 2008年 将甲肝病毒vp1编码基因(aa 24-171)和戊型肝炎病毒ORF2基因(aa 431-615)通过一段编码柔性甘氨酸链(Gly4 Ser Gly4)的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因(AEAg342).将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础. 奎翔 李鸿钧 谢天宏 张光明 刘馨 易山 杨芳 彭梅 马开利 孙茂盛关键词:甲型肝炎病毒 戊型肝炎病毒 基因克隆 重组轮状病毒肠毒素NSP4肽段aa112-175的免疫佐剂活性研究 2015年 目的确定并评价大肠杆菌中重组表达的轮状病毒肠毒素NSP4肽段aa112-175的免疫佐剂活性,并与商品化的铝佐剂进行比较。方法以葛兰素史克公司生产的2011-2012季节性流感病毒裂解疫苗福禄立适(Fluarix)为抗原,通过小鼠平行免疫实验,检测经纯化后冻干的重组肽段aa112-175、铝佐剂的佐剂活性。得到了初次免疫后3周,小鼠Fluarix特异的Ig G水平,以及加强免疫后2周,小鼠Fluarix特异的Ig G水平和IFN-γ水平数据,进而比较两种佐剂的活性,判定重组轮状病毒NSP4肽段aa112-175的佐剂活性水平。结果轮状病毒肠毒素NSP4肽段aa112-175在大肠杆菌中获得分泌表达,初次免疫和加强免疫后,NSP4 aa112-175佐剂的血清特异Ig G水平与铝佐剂组相当,特异的IFN-γ水平约为铝佐剂组的2倍。结论轮状病毒肠毒素NSP4重组肽段aa112-175经肌肉注射免疫小鼠后,其加强流感疫苗的体液免疫反应的佐剂活性与铝佐剂相似,细胞免疫反应强于铝佐剂。 杨旭 刘馨关键词:肠毒素类 一种轮状病毒灭活疫苗的制备方法 本发明公开了一种轮状病毒灭活疫苗的制备方法。该方法使轮状病毒株G1,G2,G3,G4适应至人二倍体细胞系,并在人二倍体细胞系上高效繁殖,将制得的轮状病毒作为轮状病毒灭活疫苗的生产毒株。其中,所述的人二倍体细胞系为KMB1... 刘馨 孙茂盛文献传递 HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究 2005年 为探索一种提高乙肝病毒表面抗原免疫原性的新方法,用PCR和基因重组技术构建HBsAg与GM-CSF的融合基因,并在毕赤酵母中分泌表达HBsAg/GM-CSF(S-GM)融合蛋白。表达产物用SDS-PAGE检测,W estern b lot分析,离子交换柱纯化后免疫昆明鼠,ELISA检测免疫小鼠血清中抗HBsAg的抗体水平。结果显示S-GM融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达,离子交换柱一步纯化即可得到纯度达90%以上的S-GM。W estern b lot分析S-GM可分别与抗HBsAg及抗GM-CSF的抗体特异结合。ELISA检测发现第一次免疫后4w出现抗HBsAg的抗体,加强免疫后融合蛋白组几乎全部阳转,且抗体水平较HBsAg组(P=0.009<0.05)及HBsAg和GM-CSF的混合物组(P=0.032<0.05)高。HBsAg/GM-CSF融合蛋白能够在毕赤酵母中表达,且可增强HBsAg的免疫原性,为提高乙肝疫苗的免疫效果提供了新的思路与方法。 席晓蓉 易山 杨芳 李鸿钧 刘馨 孙茂盛关键词:HBSAG GM-CSF 融合蛋白 毕赤酵母 免疫原性 轮状病毒全长VP4抗原在大肠杆菌中的表达 被引量:4 2005年 刘馨 孙茂盛关键词:轮状病毒 大肠杆菌 VP4 全长 病毒蛋白 外壳蛋白