徐州医学院药学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室 作品数:68 被引量:86 H指数:4 相关作者: 郑骏年 田卉 李圆 邸洁慧 底洁慧 更多>> 相关机构: 湖南中医药大学中西医结合学院 徐州师范大学生命科学学院 广东工业大学轻工化工学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省自然科学基金 江苏省高校自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 化学工程 更多>>
荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒对人前列腺癌DUl45细胞的杀伤效果 2018年 目的 构建荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT,研究其对前列腺癌DUl45细胞的杀伤效果.方法 实时荧光定量PCR法检测对hTERT基因的mRNA表达的影响;Western blot检测对前列腺癌细胞hTERT、病毒E1A蛋白表达的影响;MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Hoechst-33342染色了解不同处理组对前列腺癌细胞凋亡的诱导作用.结果 成功包装病毒ZD55-double-hTERT;RT-PCR和Western blot结果显示:ZD55-double-hTERT组hTERT表达量明显减少,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05),所包装的病毒可以表达E1A蛋白.MTT结果显示:20MOI的各组病毒感染DUl45细胞72 h后,ZD55-double-hTERT组细胞存活率为(45.13±3.41)%,显著低于Blank组(81.60±3.31)%、ZD55-hTERT1组(70.51±4.69)%和ZD55-hTERT2组(76.93±1.63)%(P<0.05).Hoechst-33342染色结果显示:ZD55-double-hTERT(57.29±4.19)%与Blank(3.29±1.73)%、ZD55-hTERT1(23.14±3.56)%、ZD55-hTERT2(33.38±3.55)%相比,DU145细胞凋亡率明显增加(P<0.05).结论 荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT与单靶点溶瘤腺病毒比较,对前列腺癌DUl45细胞hTERT基因的沉默作用增强,抑制增殖和促进凋亡的作用进一步提高. 孙方浩 郑骏年 魏晋 刘星 徐觉剑 陈伟 娄禄 张义静关键词:前列腺肿瘤 溶瘤病毒 微RNAS 基因 霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备 2012年 为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12%SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白。该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构。GM1-ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。 杨洁 王华倩 熊祺琰 黄文睿 李泰明 吴洁 曹荣月 刘景晶关键词:霍乱毒素B亚单位 包含体 神经节苷脂GM1 合成血红素加氧酶-1-shRNA载体的实验研究 2011年 根据Genebank提供的大鼠HO-1(Hmoxl,血红素加氧酶-1)基因序列,参照RNA干扰序列设计原则,设计针对HO-1的4个RNA干扰序列,定向克隆至表达载体pGPU6-GFP-Neo中,最后采用BamH I和Pst I酶切凝胶电泳鉴定。鉴定结果显示成功合成了荷载HO-1-shRNA的表达载体。 宋远见 刘红芝 杨冬芝 张璞 刘志安 裴冬生 宗志敏 魏贤勇关键词:HO-1基因 SHRNA表达质粒 尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究 2010年 目的:探讨尾加压素Ⅱ(U-Ⅱ)对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法:将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组(25μg/mL)及U-Ⅱ+顺铂组(10-7mol/L U-Ⅱ+25μg/mL顺铂),TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高(P<0.01);与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达(P<0.01)。结论:U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。 周成华 宋征 邢淑华 武玉清 郑骏年 裴冬生关键词:肺腺癌 A549 BCL-2 BAX 干细胞介导溶瘤腺病毒治疗脑胶质瘤研究进展 2011年 溶瘤腺病毒治疗具有肿瘤特异性、安全性和反复表达治疗基因等特点,通过溶瘤腺病毒治疗胶质细胞瘤已获得令人鼓舞的成果,但局部应用溶瘤腺病毒无法作用于散在分布的肿瘤细胞,影响了治疗效果。干细胞对脑胶质瘤具有内在趋化作用,介导溶瘤腺病毒治疗胶质瘤可进一步提高疗效。 杨春华 毛立军关键词:干细胞 腺病毒科 神经胶质瘤 SPIO与Gd-DTPA增强对裸鼠肾癌移植瘤显影价值对照研究 被引量:2 2009年 目的:比较SPIO与Gd-DTPA增强对裸鼠肾癌移植瘤显影价值。方法:种植人肾癌Ketr-3细胞的雄性裸鼠14只,随机分为2组:SPIO组7只,Gd-DTPA组7只。SPIO组先行T_2WI平扫,后快速注入Resovist,注药后即时、10min重复T_2WI序列。Gd-DTPA组先行T_1WI平扫,后快速注入Gd-DTPA,注药后即时、10min重复T_1WI序列。扫描结束分别测量两组移植瘤增强前后的信号强度及计算相对增强率。结果:SPIO组注入Resovist后,即时移植瘤T_2信号强度(SI)开始下降,10min后T_2SI逐渐回复。Gd-DTPA组注入Gd-DTPA后,即时移植瘤T_1SI明显增加,10min后T_1SI亦维持于较高水平。结论:Gd-DTPA对于肾癌移植瘤的诊断有着较长的强化时间窗,且强化效果较SPIO更明显。 杨春 路欣 程丽 张秀莉 荣玉涛 徐凯 郑骏年关键词:肾癌 超顺磁性氧化铁 钆喷替酸葡甲胺 细胞荷载溶瘤病毒 2011年 溶瘤病毒是一类仅在肿瘤细胞内特异增殖的新型病毒载体,具有高度的肿瘤靶向性和良好的转染率。局部注射溶瘤病毒治疗体表肿瘤已获得显著疗效,但全身应用后机体的免疫防御机制明显限制了溶瘤病毒的治疗效果。细胞荷载溶瘤病毒可能是克服这一瓶颈的有效策略,为治疗肿瘤提供了新的平台。 徐尊佑 毛立军 陈家存关键词:溶瘤病毒 肿瘤 SATB1基因与细胞凋亡的研究进展 2012年 SATB1是一种组织特异性表达的核基质序列特异性结合蛋白,参与染色质高级结构的形成和组织特异性基因的表达调控,在免疫调节、肿瘤转移和凋亡方面发挥着重要的作用。本研究就SATB1基因与细胞凋亡的研究进展作一综述。 张宁 毛立军 温儒民关键词:SATB1 细胞凋亡 B1基因 组织特异性表达 序列特异性 特异性基因 siRNA对胃癌细胞增殖抑制及其机制的探讨 被引量:1 2012年 目的:探讨siRNA对胃癌BGC823和MGC803细胞中Cullin1(Cul1)基因表达、细胞增殖的影响及其分子作用机制。方法:体外化学合成Cul1siRNA序列,在siLentFect Lipid Reagent介导下转染2种胃癌细胞。蛋白质印迹法检测Cul1、Cyclins和CDK抑制剂蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期。结果:转染Cul1siR-NA后胃癌BGC823和MGC803细胞中Cul1蛋白表达分别下调39%和84%,Cyclin D1下调59%和62%,Cyclin E下调47%和54%,而p27蛋白表达上调52%和23%,但p21蛋白表达无明显变化。Cul1干涉后24h2种胃癌细胞的增殖能力下降(P<0.01),48和72h下降更明显,P<0.01。Cul1干涉后3和6hG1期细胞比例较对照组下降缓慢(P<0.01),而Sub-G1期Cul1干涉组与对照组差异无统计学意义。结论:Cul1siRNA可有效的干涉胃癌BGC823和MGC803细胞中Cul1基因的表达,Cul1干涉后可能通过影响Cyclins和CDK抑制剂蛋白表达从而使细胞周期停滞在G1期,最终能明显抑制胃癌细胞的增殖。 雍红梅 白津 洪雯 郑骏年关键词:胃肿瘤 遗传学 PLCε对人骨肉瘤细胞迁移侵袭影响的实验研究 被引量:1 2014年 目的研究磷脂酶Cε(phospholipase C epsilon,PLCε)对人骨肉瘤细胞株U2OS迁移侵袭能力的影响。方法 siRNA干扰U2OS细胞PLCε的表达,应用CCK-8实验检测PLCε对细胞增殖能力的影响,以划痕实验、Transwell小室模型实验测定细胞迁移能力改变情况,以明胶酶谱实验测定细胞分泌基质金属蛋白酶MMP2的变化。结果体外合成特异性PLCε基因siRNA可明显抑制U2OS细胞中PLCε的表达;沉默PLCε后,U2OS细胞的增殖能力无明显变化,而划痕愈合能力、迁移活力较对照组细胞明显下降,其分泌MMP2的水平也明显下降。结论沉默PLCε可致人骨肉瘤细胞U2OS的迁移和侵袭能力下降。 吴金霞 曹文嘉 桑苗苗 郑骏年 裴冬生关键词:SIRNA 增殖 迁移 骨肉瘤