安徽省自然科学基金(12010402112)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
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- 热休克蛋白75在肝癌细胞株中的表达及其在上皮间质转化中的作用被引量：5
- 2014年
- 目的检测热休克蛋白75（Mortalin）在肝癌细胞株中的表达,探讨其在肝癌细胞上皮间质转化（EMT）中的作用.方法选择5株人肝癌细胞和1株正常肝细胞（L02）,采用蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin的表达水平.应用RNA干扰技术（shRNA）抑制肝癌细胞株MHCC97H内源Mortalin基因的表达.采用MTT试验和流式细胞仪检测细胞活性,通过蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin、E-cadherin和Vimentin的表达水平.实验设空白组、对照组和shRNA组.结果Mortalin在Hep3B、MHCC97H、HepG2和HCCLM3中表达,而在MHCC97L和L02中不表达.干扰24h后,绿色荧光显示质粒成功转进MHCC97H.MTT试验显示转染对三组细胞的毒害作用分别为0％、2.5％和3.5％,流式细胞仪检测三组细胞早期凋亡率分别为0.8％,4.5％和9.2％.这说明转染没有引起严重的细胞损伤.干扰48h后,蛋白印迹和实时定量PCR检测结果显示,shRNA明显抑制了Mortalin的表达.收集干扰24h、48h、72h和96h后的细胞,应用蛋白印迹和实时定量PCR分析Mortalin、E-cadherin和Vimentin的关系,发现Mortalin表达抑制伴随着E-cadherin表达升高和Vimentin表达降低.结论Mortalin的表达可能与肝癌细胞的转移表型有关,可促进肝癌细胞上皮间质转化.
- 陈静刘文斌荚卫东许戈良马金良李建生
- 关键词：肝细胞癌上皮-间质转化波形蛋白
