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国家科技重大专项(2013ZX10004-002-005)
作品数:
1
被引量:3
H指数:1
相关作者:
潘建平
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2014
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幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL优势T—B联合抗原表位的鉴定
被引量:3
2014年
目的筛选并鉴定幽门螺杆菌外膜蛋白GroEL的优势T细胞和B细胞(T.B)联合抗原表位。方法采用PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株groEL基因并构建其原核表达系统,SDS—PAGE检查目的重组蛋白rGroEL表达情况。Ni—NTA亲和层析法提纯rGroEL。采用激光共聚焦显微镜法检测幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株中GroEL分布。TritonX-114法提取上述菌株外膜蛋白样本,采用Westernblot法检测外膜蛋白样本中的GroEL。采用专业生物信息学软件预测GroEL的T-B联合抗原表位并构建其噬菌体展示系统。采用Westernblot法和ELISA分别检测含T—B联合表位肽的重组噬菌体PⅢ蛋白和人工合成的T—B联合表位肽的免疫反应性。结果幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株groEL基因核苷酸和氨基酸序列相似性高达97.68%-99.63%。所构建原核表达系统能有效表达可溶性rGroEL。GroEL定位于幽门螺杆菌NCTC11637和SS1株外膜。GroEL168、GroEL258、GroEL288、GroEL365、GroEL396和GroEIA38六个主要的预测T—B联合抗原表位中,GroEL168显示了很强的阳性杂交信号。ELISA结果显示,GroEL168免疫反应性最强(P〈0.01),其次为GroEL258和GroEL288(P〈0.05)。结论GroEL是幽门螺杆菌外膜蛋白。GroEL168是GroEL的优势T-B联合抗原表位,可用于制备幽门螺杆菌多抗原肽疫苗。
吴圆圆
严杰
孙爱华
潘建平
关键词:
幽门螺杆菌
外膜蛋白
GROEL
噬菌体展示
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