甘肃省科技攻关计划(ZGS052-A41-0006-03)
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 相关作者：李炯刘俊林刘湘涛刘艳红尚佑军更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金甘肃省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性被引量：5
- 2008年
- 【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。
- 李炯刘艳红刘湘涛尚佑军刘俊林安芳兰殷宏
- 关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳蛋白
- 口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建被引量：8
- 2006年
- 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。
- 刘艳红李炯刘俊林刘湘涛尚佑军殷宏
- 关键词：A型口蹄疫病毒衣壳蛋白基因蛋白酶基因
