上海市科技兴农重点攻关项目([2009]5-2)
- 作品数：2 被引量：15H指数：2
- 相关作者：童光志于海闫丽萍周艳君李国新更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目中国博士后科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：7
- 2010年
- 根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。
- 马继红于海周艳君李国新闫丽萍张善瑞王斌童光志
- 关键词：A型流感病毒TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR
- 中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒HA和NA基因的分子和遗传特征被引量：8
- 2010年
- 目前流行的甲型H1N1流感病毒是一个复杂的基因重配病毒。对病毒的分子生物学研究,尤其是病毒囊膜蛋白血凝素（haemagglutini,HA）基因和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因的研究,为控制和预防H1N1流感病毒具有重要的意义。本研究对中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒的HA和NA基因与疫苗株A/California/07/2009（H1N1）,以及不同国家和地区的病毒株进行核苷酸和氨基酸序列分析。从NCBI的GenBank数据库下载所需要毒株的序列,采用Lasergene 6.0软件包中的EditSeq和MegAlign进行序列分析,进化树分析采用MEGA4.1软件。进化分析表明,中国流行的2009 H1N1流感病毒与疫苗株的核苷酸同源率分别在98.8%~99.7%和98.6%~99.6%之间;裂解位点处为I/VPSIQSR↓G,不具备高致病性流感病毒的特征;有1株NA抗性病毒。尽管与疫苗株相比,中国流行株2009甲型H1N1猪源流感病毒的HA和NA基因有部分突变,但这些突变并不是重要的。本研究首次详细分析了中国流行的2009甲型H1N1猪源流感病毒株与疫苗株的HA和NA基因的分子特征,对实时监测流感病毒HA和NA基因的变化具有重要意义。
- 闫丽萍周艳君李国新于海童光志
- 关键词：疫苗株血凝素神经氨酸酶
