上海市科技兴农重点攻关项目(2005-3-4)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：岳城陈兆国于慧珠米荣升林矫矫更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学山东师范大学更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2008年
- 提取微小隐孢子虫鼠基因型卵囊总RNA,用RT-PCR扩增微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15/60基因并克隆到pMD18-T载体中。将鉴定正确的序列亚克隆于原核表达载体pET-28b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫动物后检测血清抗体。结果显示,克隆的目的基因核苷酸序列与GenBank登录的序列的同源性为98.66%。目的基因在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。表达的重组蛋白占菌体可溶性总蛋白的57.5%,纯化的重组蛋白纯度达95.2%。重组蛋白可被兔抗微小隐孢子虫血清特异性识别,用重组蛋白免疫3次后,兔血清特异性抗体达到较高水平。表明,该重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。
- 于慧珠陈兆国岳城米荣升夏延富
- 关键词：微小隐孢子虫克隆原核表达抗原性
- 微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15基因的克隆及核苷酸序列分析被引量：7
- 2007年
- 目的对编码微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)子孢子表面抗原CP15基因进行克隆和序列分析,并对其编码的氨基酸变异情况进行分析。方法对田间分离的鼠、兔、猪源微小隐孢子虫提取总RNA,经RT-PCR扩增CP15基因,克隆到pMD 18-T载体中,鉴定正确后进行序列测定,并与GenBank上下载的序列进行同源性比对。结果克隆的CP15基因核苷酸序列与GenBank登录的核苷酸序列比较,鼠源微小隐孢子虫同源性为99.23%,兔源微小隐孢子虫为97.96%,猪源微小隐孢子虫为98.72%,氨基酸序列同源性分别为100%、97.7%和98.4%。结论获得微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15基因,不同宿主来源的CP15基因序列高度一致,为利用该基因进行免疫预防和诊断研究奠定了基础。
- 米荣升陈兆国岳城于慧珠薛方民于咏兰林矫矫
- 关键词：微小隐孢子虫克隆
