国家肉鸡产业技术体系建设专项(nycytx-42-G3-01)
- 作品数：22 被引量：90H指数：6
- 相关作者：高玉龙王笑梅高宏雷祁小乐秦立廷更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家肉鸡产业技术体系建设专项哈尔滨市科技攻关计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：2
- 2011年
- 为分析我国J亚群禽白血病病毒(ALV-J)蛋鸡分离株的进化关系,本研究将山东省某鸡场采集的蛋鸡病料样品接种DF-1细胞系,利用ELISA群特异性抗原检测以及亚群特异性间接免疫荧光方法,分离鉴定得到一株ALV-J,命名为SD1009,并对其进行全基因组测序,将该序列与其他ALV-J代表性病毒株序列进行比较。结果表明:SD1009分离株的gag和pol基因相对保守,与各参考病毒株的同源性为95%～99%,env基因的同源性为91%～95%;在其5'UTR中出现了连续19 bp的插入突变,与TW-3577、SDAU09C3、JS09GY6、JS09GY3蛋鸡分离株的5'UTR基本一致,提示19 bp的插入现象可能是近年来蛋鸡ALV-J的进化趋势;此外,其3'UTR的rTM和DR区出现部分缺失现象,该缺失部分也可能与ALV-J进化相关。
- 王琦王永强康忠惠高玉龙潘伟李久宽秦立廷祁小乐高宏雷王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病病毒蛋鸡全基因组序列分析
- 蛋鸡J亚群禽白血病病毒HLJ09MDJ-1株的分离鉴定
- 2010年
- 为了解蛋鸡中禽白血病当前流行毒株类型及其gp85基因分子特征,在临床症状和病理组织学观察的基础上,采用ELISA抗原检测、特异性PCR以及亚群特异性免疫荧光试验(IFA),证实从黑龙江省某鸡场送检蛋鸡中分离到1株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),命名为HLJ09 MDJ-1;克隆了其gp85基因,并进行了序列分析比较。结果表明,该分离株的gp85基因与国内外其他ALV-J毒株的核苷酸同源性为88.2%～98.2%。其中,HLJ09 MDJ-1与英国原型株HPRS-103的同源性最高(98.2%),与美国株ADOL-7501的同源性最低(88.2%),表明HLJ09 MDJ-1的gp85基因与HPRS-103有较近的亲缘关系。本研究从蛋鸡中分离到ALV-J毒株,为研究ALV-J宿主嗜性改变和ALV-J对蛋鸡致病机制提供了素材。
- 潘伟高玉龙秦立廷祁小乐高宏雷孙芬芬王永强王笑梅
- 关键词：蛋鸡GP85基因遗传进化分析
- 蛋鸡J亚群禽白血病病毒株HB09JY03的分离鉴定及全基因组序列分析
- 利用DF-1细胞系、ELISA抗原检测以及亚群特异性间接免疫荧光法,从湖北某鸡场送检商品代蛋鸡病料中分离并鉴定出一株J亚群禽白血病病毒(命名为HB09JY03),并对其进行了全基因组测序。与GenBank中发表ALV-J...
- 潘伟高玉龙秦立廷祁小乐高宏雷孙芬芬王永强王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病病毒蛋鸡全基因组序列分析
- 文献传递
- 鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的原核表达及兔抗血清的制备被引量：1
- 2011年
- 以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP1基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切处理后与经相同酶切处理的pET-30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及测序鉴定正确的阳性重组子转化BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白His-VP1经IPTG诱导表达后主要以包涵体形式存在。Western blot检测到约97ku的目的蛋白能够与特异性的VP1单克隆抗体反应。将纯化的目的蛋白免疫新西兰白兔后获得了抗VP1蛋白的血清。该血清能够与重组杆状病毒rBacGxVP1感染的sf9细胞发生特异性反应,而且其ELISA抗体效价达到1∶25600。鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的表达与兔抗血清的制备为病毒的检测及VP1功能的研究提供了有效工具。
- 康忠惠王永强王琦李久宽秦立廷高玉龙高宏雷祁小乐林欢王笑梅许修宏
- 关键词：鸡传染性法氏囊病超强毒VP1原核表达
- 东北地区野生鸟类B亚群禽白血病的分子流行病学调查及env基因的序列分析被引量：3
- 2013年
- 为掌握我国东北地区野生鸟类感染禽白血病病毒(ALV)的情况,从黑龙江、吉林和辽宁三省采集了300份野生鸟类样品,经PCR检测,4份野生鸟类样品为ALV-B阳性,并扩增了这4份样品的env基因,对其序列进行了遗传进化分析。结果显示,4份ALV-B阳性样品的env基因与原型毒株RAV-2的同源性为99.1%～99.4%,与美国的另外2株代表毒株Schmidt-Ruppin B和Prague subgroup B的同源性为93.3%～98.4%,而与2株中国蛋鸡分离株SDAU09C2和SDAU09E3的同源性为90.2%～90.6%。以上结果表明,目前我国野生鸟类已经存在禽白血病。env基因序列分析结果表明,这4份阳性样品的env基因部分位点发生了变异,并且在多处位点存在突变。
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- 关键词：野生鸟类流行病学调查
- 东北地区J亚群禽白血病病毒的分子生物学特性分析被引量：3
- 2010年
- 为了解近两年在中国东北地区出现的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的分子生物学特性,作者从东北地区不同养禽场先后分离鉴定12株ALV-J,并对其env基因、3′UTR和3′LTR区序列进行测定和比较分析。结果显示,12株ALV-J分别位于env基因遗传进化的3个不同分支(group),其中group2和group3中毒株在env基因分别出现大片段氨基酸缺失和与其他亚群毒株重组现象;12株ALV-J在3′UTR区仍存在较大差异,具有完整E组件的ALV-J占主导地位;12株ALV-J在3′LTR区的变异主要集中于U3区,但是位于U3区的C/EBP、CArGbox、Y box、PRE box和TATA box等转录调控元件却高度保守。以上结果表明,目前中国ALV-J的基因变异仍主要集中在env基因和3′UTR区,且env基因已出现缺失或重组等新的变异趋势,并可能是ALV-J流行范围扩大、组织嗜性和致肿瘤作用明显改变的重要遗传基础。
- 刘超男高玉龙景龙高宏雷祁小乐潘伟王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病病毒转录调控元件
- 禽白血病病毒双抗体夹心ELISA方法的建立
- 为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒的方法,以原核表达的HLJ09MDJ-1(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-EL...
- 负炳岭刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅
- 关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 文献传递
- 禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 为建立一种快速有效的检测禽白血病病毒(ALV)的方法,以原核表达的HB09JY03(ALV-J)p27蛋白制备的单克隆抗体作为包被抗体,p27蛋白制备的多克隆抗体作为检测抗体建立了检测ALV的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。该方法对p27的最小检出量为1.25ng/mL,且与禽类常见的病毒鸡传染性支气管炎病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒等无交叉反应。动物感染试验结果表明,用该方法可在感染动物12d后有效检测泄殖腔分泌物中的禽白血病病毒。利用该方法检测了491份蛋清样品和180份肛拭子样品,与PCR方法的符合率分别为96.5%和93.8%。证实,该方法具有方便、快速、敏感等优点,该方法的建立为ALV的早期诊断及种鸡场的净化提供了有效工具。
- 贠炳岭刘文李德龙秦立廷刘在斯吴关祁小乐王永强高宏雷王笑梅高玉龙
- 关键词：禽白血病病毒单克隆抗体多克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 我国部分地区蛋鸡ALV-J分离株gp85基因遗传进化分析被引量：3
- 2011年
- 为了解我国蛋鸡J亚型白血病病毒(ALV-J)株来源及其遗传进化关系,本研究对2009年从我国6个省区蛋鸡场分离到的19株ALV-J的gp85基因进行克隆和测序,并与11个ALV-J参考株gp85基因作了比较分析。结果表明:19个ALV-J分离株的gp85基因长度为894bp～924bp不等,分别编码298～308个氨基酸;各病毒株间gp85推导氨基酸的同源性为71.3%～100%。遗传进化分析表明,目前我国蛋鸡ALV-J分离株来源复杂,其中13个分离株与英国原型株HPRS-103、国内麻黄肉鸡株SCAU-0901亲缘关系较近;3个分离株与美国株ADOL-7501及国内白羽肉鸡株HN0001处在同一大的分支;而另外3个分离株则各自形成独立的分支,表明其gp85基因发生了较大变异。本研究表明,19个分离株与国内早期肉鸡分离株亲缘关系较远,提示我国当前蛋鸡ALV-J株可能并非源自国内早期肉鸡ALV-J株,其来源有待进一步研究。
- 潘伟高玉龙刘超男秦立廷王永强祁小乐高宏雷王笑梅
- 关键词：蛋鸡J亚群禽白血病病毒GP85基因遗传进化
- 禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析被引量：3
- 2009年
- 【目的】原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)gp90蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清。【方法】利用PCR技术,以pMD18T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,将构建的原核表达质粒pET28-gp90,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行gp90蛋白表达并鉴定。用纯化的gp90蛋白免疫6-8周龄Balb/c小鼠,制备抗gp90的多克隆血清。用间接免疫荧光试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)滴定其效价。【结果】REV gp90基因在重组大肠杆菌中正确表达,免疫小鼠后获得的抗血清可与重组杆状病毒表达的gp90蛋白特异性反应,ELISA效价达到1∶12800,该研究为开展REV诊断试剂的研制奠定了基础。
- 高立祁小乐高宏雷高玉龙秦立廷孙芬芬张云王笑梅
- 关键词：禽网状内皮组织增生病病毒原核表达纯化多克隆抗体
