江苏省自然科学基金(BK2001170)
- 作品数：47 被引量：342H指数：10
- 相关作者：惠国桢郭礼和苗宗宁杨立业陆华更多>>
- 相关机构：苏州大学中国科学院上海生命科学研究院无锡市第三人民医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨髓基质细胞向神经元分化的两种体外诱导方法比较被引量：10
- 2004年
- 目的通过体外定向诱导人骨髓基质细胞(hBMSCs)使其分化为神经元,比较两种诱导方法。方法采用Percoll-Paque液(1.073g/ml)分离hBMSCs,体外扩增培养后,分别加入丁羟茴醚(BHA)+二甲基亚砜(DMSO)和β-巯基乙醇(BME)诱导hBMSCs分化为神经元,光镜下形态学观察,及免疫组化检测特异性神经元烯醇化酶(NSE),神经丝蛋白(NF),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数。结果hBMSCs在加入两种诱导剂后均有胞体收缩,突起伸出,NSE,NF,GFAP均有不同程度阳性率,但丁羟回醚+二甲基亚酚组的细胞存活率高,神经元阳性率(诱导成功率)高。结论丁羟茴醚+二甲基亚酚是一种较好的体外诱导hBMSCs分化为神经元的诱导剂。
- 金钧惠国桢单立冬孙兵苗宗宁陆华
- 关键词：骨髓基质细胞神经元体外诱导
- 不同来源嗅鞘细胞移植治疗脑出血的比较被引量：4
- 2009年
- 背景:嗅鞘细胞是目前已知用于移植细胞中惟一可以跨越周围神经系统与中枢神经系统边界的细胞。在众多的国内外文献中,大多以嗅球来源嗅鞘细胞作为观察对象;但采用嗅黏膜嗅鞘细胞移植具有来源方便、损伤小、可自体取材等优势。目的:比较嗅球来源嗅鞘细胞和嗅黏膜嗅鞘细胞移植对脑出血后神经功能损伤恢复作用的差异。设计、时间及地点:免疫组织化学水平的随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成。材料:选用健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,对照组、嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各10只。方法:分别获取人鼻中隔黏膜、人胚嗅球,进行嗅鞘细胞的分离培养纯化,取培养10d的细胞用作细胞移植。取SD大鼠制备尾状核出血模型,嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各取10μL细胞悬液在立体定向下引导微量注射器向大鼠脑组织内匀速注射(1μL/min),对照组注入等量培养基,注射点为右侧尾状核。主要观察指标:观察两种来源嗅鞘细胞的体外培养情况。嗅鞘细胞移植后对动物行定期行为学评定,功能损伤越重,得分越高;并观察组织切片靶区域免疫细胞化学分析结果。结果:从体外培养结果看,无论在形态上还是表型上,两者无明显区别。嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组大鼠的Longa5分制法及前肢放置试验评分在移植后第14,28,56天显著低于对照组(P<0.05),两移植组差异无显著性意义(P>0.05),移植组各时间段差异无显著性意义(P>0.05)。结论:用于移植修复神经功能的两种嗅鞘细胞在细胞特性、移植效果方面均无明显差异。
- 吴卫江陆华葛风徐杰朱爱华
- 关键词：嗅鞘细胞脑出血细胞移植神经损伤
- 神经干细胞体外长期培养和外源基因表达被引量：8
- 2002年
- 目的 探讨胚胎大鼠神经干细胞的体外培养条件及外源基因的表达效率。方法 从胚胎大鼠脑皮质中机械分离细胞,应用N2培养基进行培养和扩增,采用免疫组织化学方法进行鉴定,应用Ad5βgal重组腺病毒载体检测神经干细胞表达外源基因的能力。结果 从胚胎大鼠的大脑皮质中成功分离培养出神经干细胞,在悬浮状态下培养形成典型的神经球并表达波形蛋白和巢蛋白。近100％的细胞可被Ad5βgal基因感染并表达lacZ基因。细胞可用机械方法传代,常规冻融和复苏,体外长期培养可达3个月。结论 神经干细胞可在体外长期稳定培养和传代,能表达βgal外源基因,是细胞治疗和基因治疗的良好载体。
- 杨立业惠国桢包大士蒋丽珍费俭郭礼和
- 关键词：神经干细胞外源基因体外培养细胞治疗
- 人胚嗅鞘细胞与鼠胚胎脊髓组织联合移植对大鼠脊髓损伤的治疗(英文)被引量：3
- 2006年
- 背景:脊髓损伤高发且后果严重,至今尚无有效措施挽救丧失的神经功能。哺乳动物嗅觉系统的一类特殊胶质细胞的移植引起关注。目的:观察人胚嗅鞘细胞和大鼠胚胎脊髓共同移植在促进大鼠横断脊髓轴索再生方面是否产生协同作用。设计:开放性实验。单位:无锡第三人民医院细胞室,苏州大学附属第一医院神经外科,东南大学附属中大医院神经外科。材料:实验于2002-09/2004-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成。①选取清洁级成年雌性SD大鼠36只,随机数字表法分成4组:人胚嗅鞘细胞组10只、鼠胚胎脊髓组10只、联合移植组10只,模型组6只。②取12周左右的流产新鲜人胚胎(产妇知情同意)用于嗅鞘细胞的培养纯化。③取孕14d的SD大鼠1只,施行剖腹手术将胎鼠连同胎膜一同取出,用于新鲜胚胎脊髓的制备。方法:①4组大鼠均建立脊髓半切洞模型。模型组在损伤洞腔内填塞明胶海绵加全培养基8μL,在损伤上下各1mm处注射相同培养基2μL;人胚嗅鞘细胞组明胶上给予嗅鞘细胞悬液8μL,损伤上下各1mm处注射细胞悬液2μL;鼠胚胎脊髓组将组织碎块直接填塞在洞腔内,外覆明胶;联合移植组将同样大小的胚胎脊髓填塞在洞腔内,然后用微量加样器将8μL的嗅鞘细胞悬液注入洞腔,外覆明胶,在洞腔上下各1mm处注射细胞悬液2μL,按层缝合肌层皮肤。②定期对各组大鼠进行行为学评定,结合病理学观察,并通过辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺逆行示踪技术,评价嗅鞘细胞和胚胎脊髓对神经元存活、纤维再生的影响。主要观察指标:①人胚嗅鞘细胞体外培养及纯化。②体外免疫细胞化学分析。③大鼠后肢运动功能BBB评分测定结果。④移植物及受损脊髓修复的免疫组化检测结果。⑤辣根过氧化物酶-四甲基联苯胺示踪对各组被标记的皮质及中脑红核神经元的定量分析情况。结果:①人�
- 吴卫江惠国桢吕然博苗宗宁
- 关键词：细胞移植嗅神经脊髓损伤
- 多巴胺对多巴胺能神经母细胞SH-SY5Y的毒性作用被引量：2
- 2007年
- 目的探讨多巴胺(DA)对多巴胺能神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的神经毒性作用及可能机制。方法应用MTT法检测DA对SH-SY5Y毒性作用,通过吉姆萨染色、Hoechst 33258标记、透射电镜、DNA ladder以及TUNEL检测DA诱导多巴胺能神经细胞凋亡形态结构及化学特征。结果MTT法检测到DA直接造成多巴胺能神经母细胞损伤,并呈浓度依赖性,有统计学意义(P<0.05);吉姆萨染色、Hoechst33258标记、FACS、电镜、DNA ladder以及TUNEL均检测到细胞凋亡形态及化学特征。结论DA在体外可以造成DA能神经母细胞SH-SY5Y损伤,可能是通过凋亡机制造成细胞丢失的。
- 栗超跃惠国桢暨荀鹤史锡文郭礼和
- 关键词：多巴胺神经毒
- 高-低密度法分离培养大胚龄人神经干细胞
- 2003年
- 目的 从大胚龄人胚脑中分离培养并鉴定神经干细胞。方法 采用高 低密度培养、无血清培养和单细胞克隆技术分离培养出神经干细胞 ,并应用免疫荧光染色鉴定。结果 从 13周龄胚脑中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞 ,它们具有连续克隆能力 ,可传代培养 ,表达神经巢蛋白抗原 ,分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少枝胶质细胞的特异性抗原。结论 高
- 蒋云召陆华惠国帧苗宗宁卞林周建宏唐志放陆爻忠
- 关键词：神经干细胞免疫荧光染色法
- 山梗菜碱对MPTP诱导小鼠帕金森病的治疗效应
- 2008年
- 栗超跃惠国桢史锡文张建国周伟柴昌步星耀
- 关键词：山梗菜碱帕金森病MPTP多巴胺递质小鼠多巴胺释放
- 人脐血源性间充质干细胞的体外培养及生物学鉴定被引量：19
- 2005年
- 目的建立体外培养、扩增人脐带血间充质干细胞(MSCs)的方法,初步鉴定其生物学特性。方法无菌条件下取正常足月剖宫产的脐带血,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,以偏酸性的MesencultTM作为培养基进行培养和纯化获得贴壁细胞层,测定MSCs的生长曲线,用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果来源于脐血的单个核细胞在体外用合适的培养基培养,细胞贴壁后出现破骨样及间充质样的细胞。间充质细胞为成纤维样的细胞形态,并表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105,但不表达CD34、CD45、CD106和HLADR。这与源于骨髓的MSCs一致。结论脐带血中含有的MSCs可在体外培养、扩增,能够为实验和临床的应用提供一种新的间充质干细胞来源。
- 陈镭苗宗宁张东强陆华王玲栾文忠惠国桢
- 关键词：间充质干细胞体外培养生物学鉴定血源性CD106
- 大鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的体外诱导动态观察被引量：4
- 2003年
- 目的 动态观察体外定向诱导大鼠骨髓基质细胞 (BMSCs)分化为神经细胞的时程变化。方法 采用Percoll Paque液 (1 0 73g/ml)分离BMSCs体外扩增培养后 ,加入丁羟茴醚 +二甲基亚砜诱导其分化为神经细胞 ,分别于 1、2、3、4h后光镜下观察形态变化及通过免疫组化和免疫荧光染色测定特异性神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性细胞数。结果 BMSCs在加入诱导剂后 1h出现胞体收缩 ,突起伸出 ,有不同程度NSE、NF、GFAP表达 ,3h后达高峰。结论 丁羟茴醚 +二甲基亚砜在一定时间内是一种较好的体外诱导剂。
- 黄坚金钧惠国桢
- 关键词：骨髓基质细胞神经细胞细胞分化体外诱导
- 人胚嗅鞘细胞不同取材及培养方法对纯度的影响被引量：15
- 2004年
- 目的通过对多种方法的比较获得较为理想的取材和纯化嗅鞘细胞的措施。方法应用3种不同的取材方法各获取20份样本,对取材引起的细胞损伤以及同一条件下培养10d后细胞纯度进行对照;在将细胞接种密度统一调整到106/ml后应用3种纯化方法各对20份样本处理并作纯度比较;同样密度和接种数量的原代细胞各取10份种植于3种不同培养皿,对细胞贴壁速度和最终纯度进行检验;对3种常用的细胞接种密度104/ml、105/ml、106/ml统一其他培养条件后作比较。结果我们从中筛选出最佳取材方法为直接挤压法,其获得的细胞纯度为82.56%,明显高于传统分离法(66.24%)和机械过滤法(61.35%);最好的纯化嗅鞘细胞方法为免疫吸附法,其细胞纯度达到94.66%,而差速贴壁法(81.59%)和化学试剂法(76.45%)均由于损失细胞太多不可取;同时发现包被培养皿对纯化细胞意义重大,P75包被组不仅培养细胞的纯度最高(87.69%),而且还有利于OECS的快速贴壁;高密度接种细胞对提高细胞的最终纯度也是非常有利,3组(接种密度分别为104/ml、105/ml、106/ml)培养10d后的p75阳性细胞率差异巨大,分别为34.61%,49.39%,71.55%。结论应用最佳取材及培养方法收获大量嗅鞘细胞将对其进一步的基础研究以及将来应用于临床奠定基础。
- 吴卫江惠国桢陆华吕然博
- 关键词：取材纯度细胞培养
