国家自然科学基金(30771914)
- 作品数：13 被引量：23H指数：3
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- 定位表达于溶酶体、泛素的PrP载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建定位于溶酶体、泛素的PrP表达载体，并进行蛋白表达特点及定位的鉴定。方法将泛素基因、溶酶体膜定位信号序列基因和PrP基因连接，克隆至pcDNA3．1载体中，构建表达载体pcDNA3．1-UPrP,pcDNA3．1-PrPL；瞬时转染真核表达细胞，经Western Blot和间接免疫荧光技术检测PrP表达特点。结果构建的各种PrP定位表达载体均可定位表达具有三种类型的糖基化分子的PrP，以双糖基化分子类型最多。带有泛素、溶酶体信号的质粒pcDNA3．1-UPrP、pcDNA3．1-PrPL的PrP表达随着时间的延长蛋白表达量下降，提示泛素、溶酶体信号能加速表达PrP在细胞内的降解。结论成功构建了溶酶体、泛素定位表达的PRNP核酸疫苗载体pcDNA3．1-uPrP、pcDNA3．1-PrPL，为PRNP核酸疫苗的研究奠定了一定的基础。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵陈操王新王克霞韩俊董小平
- 关键词：朊病毒疫苗DNA
- 人tau蛋白外显子2和外显子3特异性抗体的制备
- 2009年
- 目的制备人微管相关蛋白tauN端的外显子2和外显子3特异性多克隆抗体。方法从人外周血DNA中获得tau蛋白外显子2及外显子3序列并连接至原核表达载体pGEX-2T，表达纯化重组融合蛋白GST—E2、GST-E3；以此融合蛋白免疫家兔及小鼠制备抗血清，通过ProteinG／A、偶联GST蛋白的溴化氰（CNBr）活化柱对抗血清进行亲和纯化；用WesternBlot及ELISA方法确定所制备抗体的特异性和敏感性。结果在大肠埃希菌中表达纯化出人tau外显子2和外显子3重组融合蛋白GST-E2和GST-E3，相对分子质量为29×10^3。免疫实验动物后获得抗血清，经系列纯化后WesternBlot和ELISA检测显示，制备的抗人tau蛋白外显子2和外显子3抗体具有良好的特异性和免疫反应效价。结论成功制备了4种人tau外显子2和外显子3特异性抗体，为进行tau蛋白在神经退行性疾病中的作用研究提供了基础。
- 陈操王桂荣石琦张宝云梅国勇李媛王新周瑞敏韩俊赵玉军董小平
- 关键词：蛋白质类外显子抗体病毒朊病毒病
- 朊病毒病实验动物脑组织PrP^Sc样本库的建立
- 2008年
- 目的建立朊病毒病实验动物脑组织检测样本库，检测其在特定保存条件下的稳定性，以用于动物和人朊病毒病诊断技术的评估和考核。方法选用30只经颅内注射感染羊瘙痒因子263K的仓鼠和30只正常仓鼠，每只分别制备10％、1％和0．5％3种浓度的脑组织匀浆，分装冷冻保存。以Western Blot方法确定脑组织匀浆中PrP^Sc的存在情况，并分别在建库半年和3年检测PrP^Sc的稳定性。结果30只感染仓鼠10％脑组织匀浆全部可检出PrP^Sc，1％脑组织匀浆有26份为PrP^Sc阳性，0．5％脑组织匀浆有19份为PrP^Sc阳性。半年及3年后复检，PrP^Sc阳性检出率基本不变。所有正常仓鼠脑匀浆均为PrP^Sc阴性。结论建立了稳定性良好的含有90份PrP^Sc阳性标本和90份PrP^Sc阴性样本的朊病毒病实验动物脑组织榆测样本库。
- 张宝云田婵韩俊高晨石琦姜慧英周伟董小平
- 关键词：朊病毒羊瘙痒病
- 中国2008年克雅氏病监测病例特征分析被引量：10
- 2009年
- 目的了解中国克雅氏病（CJD）的发病情况及流行病学、临床特征。方法对2008年中国克雅氏病监测网络获得的可疑CJD病例的临床及流行病学资料进行分析，收集患者脑脊液及血液样品，利用Western blot方法检测脑脊液中是否含有14—3—3蛋白，提取全血基因组DNA并利用PCR及测序方法对PRNP基因进行129位多态性及基因突变分析。结果共发现散发型CJD临床诊断病例31例，疑似诊断病例11例，2例家族性CJD和1例格-斯-斯综合征。病例的地理分布及职业无明显聚集性；临床诊断病例发病平均年龄56．7岁，男女比例8：9；疑似诊断病例发病平均年龄为57．4岁，男女比例5：6。快速进行性痴呆为最常见的首发症状，占全部诊断病例的33．3％。临床诊断病例比疑似诊断病例出现更多的典型临床表现。结论2008年中国监测到的CJD病例以散发型为主，病例的地理分布、职业、性别比例以及平均年龄均符合散发型CJD的分布特点。
- 田婵高晨石琦韩俊周伟张宝云高永军董小平
- 关键词：克雅氏病
- 不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究
- 2008年
- 目的研究不同剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后，在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关。方法以胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）作为星形胶质细胞增生的分子标志物，采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达，经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异。结果与正常对照相比，不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高，但各感染剂量组间无显著差异。结论不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似，与感染剂量及潜伏期无关联性。
- 田婵张宝云石琦韩俊高晨韩露董小平
- 关键词：朊病毒纤维蛋白
- 具有八肽重复区突变的朊蛋白其抗氧化性降低被引量：1
- 2008年
- 抗氧化性被认为是细胞朊蛋白的主要生理功能之一,研究显示它的抗氧化性主要与朊蛋白序列中的八肽重复区有关.但是迄今为止它的抗氧化机制仍旧不清楚.我们构建表达了野生型朊蛋白(PrP-PG5)和它的不同八肽重复区突变体0(PrP-PG0),9(PrP-PG9)和12(PrP-PG12).各种原核表达突变体蛋白在H2O2氧化后出现分子量的增加,并可导致羰基产生.MTT和细胞计数实验显示表达各种突变体的细胞存活率明显低于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.细胞内ROS检测发现表达各种突变体的细胞内ROS水平明显高于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.此外,谷胱甘肽过氧化物酶检测显示表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞内谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于表达各种突变体的细胞.H2O2处理细胞后,转染突变体的细胞总的羰基产物数量明显高于转染野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞,而表达突变体细胞及转染空载体的细胞较表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞对氧化物质的抵抗性明显减弱.这些结果提示,具有正确八肽重复区数目对于朊蛋白(PrP)的抗氧化作用起关键作用,PrP的抗氧功能的丢失可能参与家族性朊病毒病的病理过程.
- 安润董辰方雷艳君韩露李平陈建明王桂荣石琦高晨姜慧英周伟韩俊楚雍烈董小平
- 关键词：PRP抗氧化性谷光甘肽过氧化物酶细胞活性
- 离子型聚丙烯纤维对病毒的吸附作用研究
- 2011年
- 目的 研究新型离子型聚丙烯纤维以防止病毒感染.方法 构建四种离子型表面活性聚丙烯纤维,与表达GFP的重组腺病毒分别相互作用,通过观察GFP的表达和病毒六邻体壳粒基因的表达来判断纤维对病毒的吸附能力.结果 四种纤维对腺病毒具有一定的吸附或灭活能力.金属离子纤维和两性离子聚丙烯纤维具有更好的灭活病毒能力.结论 提示金属离子纤维和两性离子聚丙烯纤维可以作为实验室防护装备的原材料.
- 宋娟周伟吴政王颖崔雨周绍箕李朝品韩俊
- 关键词：聚丙烯类腺病毒科
- 病毒学实验室的溢洒现象研究
- 2009年
- 目的研究病毒实验室的实验操作过程中的溢洒现象和病毒液液体跌落后的溅洒范围。方法利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒rADV为模式病毒，通过两组不同工作经验的实验室人员模拟实验室中的常规吸液、移液等操作，通过观察病毒液跌落至96孔细胞培养板是否出现绿色荧光信号来确定实验操作的溢洒情况；我们也将实验常规使用的病毒液量（1ml、1.5ml、4ml、8m1）从实验室可能的两种跌落高度（75cm、110cm）模拟不慎跌落后可能的溅洒范围。结果（1）两组人员使用机械移液装置均未出现溢洒现象；（2）第1组具有5年以上工作经验的实验室人员使用吸管移液等操作，出现因溢洒而导致7孔阳性信号，而2年以内工作经验的第二组人员，在实验操作过程中出现了81孔阳性信号，远大于第1组人员；（3）在两种滴落高度的情况下，1ml、1.5m1、4ml和8ml液体跌落溅撒范围最大半径分别为0.92、1.57、2.63和2.68m。结论生物安全实验室的移液操作过程中实验室人员工作经验非常重要；病毒液不慎跌落的溅撒范围与液体量有关。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣魏强韩露王雷田婵韩卫芳武桂珍王克霞韩俊
- 关键词：安全管理病毒
- 朊病毒实验室风险评估
- 2011年
- [目的]为从事朊病毒相关操作的实验室做好有关的风险评估及生物安全防护工作提供依据。[方法]从朊病毒的病原学、致病性、传播途径、危害性、预防和实验活动的特点等方面提出朊病毒实验室风险评估要求。[结果]朊病毒实验室风险评估有利于建立朊病毒实验室标准操作程序从而有助于保护朊病毒实验人员。[结论]朊病毒的实验室风险评估是朊病毒实验室活动的前提,对保护实验室工作人员的安全具有非常重要的意义。
- 宋娟王颖崔雨甘星李朝品韩俊董小平
- 关键词：朊病毒实验室风险评估
- 两种模式病毒灭活风险实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究模式病毒在环境中的存活能力，以及常用消毒液和紫外线对病毒的灭活能力。方法利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒rADV和重组单纯疱疹病毒rHSV作为模式病毒，将滴有病毒的NC膜于室温下、浸于不同稀释度的各消毒液（乙醇、次氯酸钠、来苏尔、新洁尔灭）中，分别于15、30、45、60、75、90、105min，或紫外线连续照射20、40、60、80、100min后，放入细胞表面培养48h，于荧光显微镜下观察。结果（1）rHSV在环境中的平均存活时间不足60min，rAd病毒均高于105min；（2）100％、70％、50％的乙醇，以及5％、2．5％和1．25％次氯酸钠均可灭活两种病毒；（3）0．1％的新洁尔灭15min可灭活rHSV和rADV；0．01％新洁尔灭作用45min可灭活rHSV病毒；0．05％新洁尔灭中作用75min可灭活rADV病毒；而0．01％新洁尔灭则无灭活作用；（4）5％和2．5％的来苏尔可灭活两种病毒；但1．25％来苏尔灭活rADV病毒需75min；（5）紫外线照射大于20min可有效灭活rHSV，但对rADV无灭活作用。结论无包膜病毒与有包膜病毒在环境中的生存能力是不同的；两种模式病毒对各消毒液的抵抗能力也不尽相同，应根据病毒的特点选择不同的灭活方式。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵韩露韩卫芳魏强周永运武桂珍王克霞韩俊
- 关键词：生物安全消毒剂灭活
