益生菌的降胆固醇作用与它们所产的胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)有关,这使得胆盐水解酶成为近年来研究的热点之一。文中主要对植物乳杆菌中胆盐水解酶的克隆表达、生化特性以及降胆固醇作用等方面的研究现状进行了综述,并展望了它未来的发展方向。以期对植物乳杆菌胆盐水解酶的研究及其相关制品的开发利用提供一定的指导意义。
由于用大肠杆菌对植物乳杆菌来源的bsh基因进行胞内和胞外表达时,它们很容易形成包涵体,而且大肠杆菌的内毒素会显限制BSH的应用,所以利用毕赤酵母这一高效的表达系统对其进行了分泌表达.首先用融合PCR的方法将信号肽α-factor与BSH连接,然后再克隆到质粒pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-α-factor-BSH.重组质粒经过SalⅠ线性化后转化至毕赤酵母GS115.表达产物经SDS-PAGE分析和酶活测定发现,重组BSH的相对分子质量(Mr)和胞外酶活分别为37.0×103和1.08 U mL-1.通过正交实验[L9(34)]对发酵条件优化后,胞外总酶活达到2.69 U mL-1,比原来提高了1.49倍.研究为胆盐水解酶的分离纯化、酶学性质研究以及大规模生产奠定了一定的基础.
利用海藻酸钠固定化蛋白酶,探求其对牛奶过敏原αs1-酪蛋白的特异性降解。以固定化酶的活力回收率为指标,探究了固定化的条件、固定化酶的部分性质以及固定化酶在去除牛奶过敏原蛋白的应用。结果表明:最优固定化条件为,海藻酸钠质量分数为4.0%,CaCl_(2)的质量分数为3.0%,固定化时间0.5 h,固定化酶量为V(海藻酸钠)∶V(酶液)为1∶3,固定化效率达到67.5%;固定后的酶最适反应温度70℃,最适反应p H 10.0,连续使用6次后剩余酶活达到40.0%以上;将固定化酶作用于2.0%脱脂奶粉溶液中,60℃条件下反应25 min过敏原αs1-酪蛋白得到特异性降解。
