国家自然科学基金(30600292)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：谌贻璞唐功耀芮宏亮杨敏杨敏更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京安贞医院中日友好医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂联素在人肾小球微血管内皮细胞中的表达与调节被引量：1
- 2010年
- 目的探讨人肾小球微血管内皮细胞（HRGEC）是否合成脂联素，及肿瘤坏死因子α（TNF—α）对HRGEC合成脂联素的影响。方法用免疫组织化学染色检测脂联素在人肾组织表达；分别用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法检测体外培养的原代HRGEC对脂联素mRNA及蛋白的表达，并对PCR产物进行DNA测序鉴定。用TNF-α刺激HRGEC，分别用实时荧光定量PCR和时间分辨荧光法检测HRGEC脂联素mRNA及蛋白表达变化。结果（1）免疫组织化学染色显示人肾小球毛细血管壁脂联素染色强阳性。（2）RT-PCR检测发现原代培养的HRGEC表达脂联素mRNA：PCR产物经DNA测序与基因库中的脂联素DNA序列完全一致；蛋白质印迹检测证实HRGEC培养上清中含有脂联素蛋白。（3）不同浓度TNF—α刺激HRGEC 24h，与未刺激组比较，实时荧光定量PCR显示，250IU／ml和500IU／ml组的脂联素mRNA表达量显著上调（P〈0．05和P〈0．01）；时间分辨荧光检测显示，250IU／ml和500IU／ml组的脂联素蛋白含量显著增加（P〈0．05和P〈0．01）。（4）500U／ml浓度TNF-α刺激HRGEC6、12、24和48h，与未刺激组比较，6、12和24h组的脂联素mRNA表达均显著上调（P〈0．05，P〈0．05和P〈0．01）；24h和48h组的脂联素蛋白含量显著增加（P〈0．01）。结论HRGEC能合成脂联素，TNF-α可上调HRGEC的脂联素mRNA和蛋白表达。
- 唐功耀杨敏谌贻璞王艳艳
- 关键词：脂联素肿瘤坏死因子-Α肾小球内皮细胞DNA测序
- 脂联素拮抗血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞细胞外基质产生被引量：1
- 2011年
- 目的观察脂联素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人。肾小球系膜细胞（MC）表达转化生长因子β1（TGF-β1）及纤连蛋白（FN）的影响，并探讨其信号通路。方法用RT0PCR和间接免疫荧光法对MC表达脂联素受体进行检测；用实时定量PCR和酶联免疫吸附法检测脂联素对AngⅡ诱导MC表达TGF—β1及FN的影响；用Western印迹法测定p-AMPK／AMPK比值。结果（1）MC能表达脂联素受体1和2。（2）10mg／L脂联素可明显抑制AngⅡ诱导MC高表达TGF-β1及FN（均P〈0．05）。（3）10mg／L脂联素可活化MC的AMPK信号通路。（4）40μmol／L Compound C（AMPK阻断剂）可明显减弱脂联素对AngⅡ诱导MC高表达TGF-β1及FN的拮抗作用（均P〈0．05）。结论脂联素可通过活化AMPK对AngⅡ诱导MC高表达TGF一β1及FN发挥抑制作用。
- 谭敏谌贻璞唐功耀芮宏亮
- 关键词：脂联素转化生长因子Β1肾小球系膜细胞纤连蛋白
- 脂联素对脂肪细胞条件培养基促系膜细胞合成转化生长因子β1的作用被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨脂联素对脂肪细胞条件培养基促系膜细胞（MsMC）合成转化生长因子β1（TGFβ1）的作用.方法 将MsMC分为7组：A组加入无血清DMEM培养基;B组加入脂肪细胞条件培养基;C组加入pSuper质粒转染后条件培养基;D组加入pcDNA3.1（-）质粒转染后条件培养基;E组加入脂联素siRNA-pSuper表达质粒转染后条件培养基;F组加入脂联素pcDNA3.1（-）表达质粒转染后条件培养基;C组加入添加3 mg/L脂联素的脂肪细胞条件培养基.用脂联素pcDNA3.1（-）表达质粒、脂联素siRNA-pSuper表达质粒、pcDNA3.1（-）质粒及pSuper质粒分别转染3T3-L1细胞（脂质体2000转染法）,诱导细胞分化为成熟脂肪细胞后收集细胞,以蛋白质印迹法检测细胞裂解液中脂联素蛋白含量.孵育MsMC 9 h后,收取细胞,用实时定量聚合酶链反应检测细胞裂解液中TGFβ1 mRNA水平;孵育24 h后收取上清液,用酶联免疫吸附试验检测上清液中TGFβ1蛋白质水平.结果 与未转染的成熟脂肪细胞比较,用脂联素pcDNA3.1（-）表达质粒转染3T3-L1细胞得到的成熟脂肪细胞的细胞裂解液中脂联素含量增加[（0.59±0.06）比（0.21±0.02）],差异有统计学意义（P＜0.05）;用脂联素siRNA-pSuper表达质粒转染3T3-L1细胞得到的成熟脂肪细胞的细胞裂解液中脂联素含量减少[（0.12±0.01）比（0.39±0.02）],差异有统计学意义（P＜0.05）.B组TGFβ1 mRNA水平及蛋白质表达含量高于A、F、G组[TGFβ1 mRNA：（3.09 ±0.15）比（1.50±0.35）、（2.1±0.53）、（1.8±0.42）,TGFβ1蛋白质水平：（708±10）比（224±16）、（382±11）、（300 ±25）],差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 脂肪细胞条件培养基可刺激系膜细胞合成TGFβ1,而脂联素对这一效应具有明显抑制作用.
- 杨敏芮宏亮谌贻璞
- 关键词：肾小球系膜细胞脂联素转化生长因子Β1
