江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(ZY320714)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 重组腺病毒介导siRNA抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA,并观察其抑制大鼠肝细胞NF-κB p65表达的效果。方法(1)筛选针对大鼠NF-κB p65特异性siRNA靶序列,设计合成其对应的双链DNA,插入到pShuttle-H1中,得到psiRNA-NF-κB p65质粒。将构建好的psiRNA-NF-κB p65质粒与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行重组,酶切鉴定、293A细胞包装、扩增,得到重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA。(2)将构建好的Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞株BRL,48h后,采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB p65表达。结果成功地构建了重组腺病毒Ad-NF-κB p65-siRNA;Ad-NF-κB p65-siRNA转染大鼠肝细胞48h后,NF-κB的mRNA水平下降了81%,细胞内的NF-κB蛋白浓度下降了71%。结论腺病毒介导的RNAi技术体外显著地抑制大鼠肝细胞NF-κB p65的表达。
- 宇汝胜钱海鑫汪泳
- 关键词：核转录因子-ΚB腺病毒
