广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(10100019-21)
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 相关作者：陈东张穗生陈小玲黄日波黄俊更多>>
- 相关机构：广西科学院广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划国家科技部科技人员服务企业行动项目广西科学院基本科研业务费资助项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 两株高糖分利用能力的酿酒酵母呼吸突变体选育被引量：4
- 2012年
- 以酿酒酵母乙醇发酵高产工业菌株MF1002为始发菌株,对其营养细胞进紫外线诱变,筛选得到两株性状稳定的呼吸缺陷型突变体MF15c和MF11a。菌体细胞对2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)显色测定呼吸强度的结果表明,两突变菌株的相对呼吸强度分别只有始发菌株的57.77%和47.25%。与现有报道的呼吸缺陷突变体不同,两株突变体的细胞生长速率只在培养初期略低于始发菌株,总体生长速率与始发菌株几乎没有差异,在YPD平板上培养也不形成小菌落。比较蔗糖发酵试验表明,两株突变体的乙醇产量较始发菌株只分别略提高6.48%-6.59%(MF15c)和1.66%-1.97%(MF11a),但发酵终止的残总糖含量却显著低于始发菌株,分别减少34.85%和19.70%,发酵效率较始发菌株分别显著提高6.69%和4.71%,表明这两株突变体为新型的呼吸缺陷型突变。鉴于提高乙醇发酵的发酵效率可显著降低生产成本,认为这两株突变菌株具有较高的潜在工业利用价值。
- 韦缘张穗生陈东陆琦陈英黄日波
- 关键词：酿酒酵母紫外线诱变乙醇生产
- 里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造被引量：4
- 2014年
- 【目的】用分子改造的方法改造里氏木霉（Trichoderma reesei）的纤维二糖水解酶基因cbh1，提高其纤维素酶活力，为工业化生产纤维素酶提供参考。【方法】用DNase Ⅰ消化里氏木霉cbb1，回收100bp左右的片段后用T4DNA连接酶连接，以连接产物作为模板进行PCR扩增，将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体，使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组。通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株，在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列。【结果】经克隆测序获得基因片段大小为637bp，与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88％-98％，确定为里氏木霉cbh1的基因片段。经DNaseⅠ消化15min、T4DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因。将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体，得到cbh1基因突变体库。从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1．7518倍的突变菌株E2-1。序列比对分析发现，与出发菌株相比，突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变，其中5个碱基为置换突变，8个碱基为缺失突变，1个碱基为插入突变，分布于cbh1基因的9个位置。【结论】改造后的cbhI基因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组，进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力。
- 陈小玲张穗生黄俊雷富陈东
- 关键词：里氏木霉纤维素酶分子改造碱基突变
