浙江省自然科学基金(Y3090657)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：羊健张恒木陈剑平吕明芳辛星更多>>
- 相关机构：浙江省农业科学院浙江师范大学山西农业大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 水稻瘤矮病毒P12蛋白抗血清制备及其应用被引量：2
- 2013年
- 为了进一步研究水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)P12的功能,将RGDV-GX P12编码区亚克隆至原核表达载体,并导入大肠杆菌诱导表达;重组的P12融合蛋白经Ni-NTA His·Bind Resins纯化后用于免疫小鼠制备抗血清,并进行Western blotting分析。结果显示,约41 kD大小的RGDV P12融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达;利用该重组蛋白所制备的抗血清可特异地与融合表达和非融合的P12蛋白发生强烈的免疫学反应。利用该特异性抗血清在病毒粒子样品中检测不到P12蛋白,而在病株总蛋白样品中可检测到1条与预期大小一致的明显条带,表明RGDV P12是一种非结构蛋白。
- 孟媛辛星羊健张恒木王建明陈剑平
- 关键词：水稻瘤矮病毒原核表达抗血清
- 与水稻黑条矮缩病毒p5b互作的水稻基因片段筛选被引量：1
- 2012年
- 由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框(ORF)编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体,同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上(pGBK-p5b),Western Blot和自激活实验结果显示p5b可在酵母中正确表达且无自激活活性。进一步利用p5b蛋白作为诱饵用酵母双杂交筛选水稻cDNA表达文库,鉴定出一些参与光合作用、呼吸作用等重要代谢过程的关键酶基因片段,这些酶可能与p5b蛋白之间存在相互作用,推测这些互作在病株症状发展过程中起作用。
- 陆颖羊健张恒木陈剑平
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒酵母双杂交
- 水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测被引量：8
- 2012年
- 水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。
- 吕明芳羊健张恒木陈剑平
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达
