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血清蛋白质组分析方法筛选并鉴定TCE致L-02肝细胞损伤相关蛋白: 目的:采用血清蛋白质组分析方法(SERPA)筛选并鉴定三氯乙烯(TCE)致肝细胞损伤相关特异蛋白。方法:以40μmol/LTCE处理正常L-02肝细胞,提取总蛋白,分别利用TCE接触者血清、TCE中毒患者急性期血清和TC...; 刘建军邢秀梅黄海燕庄志雄何浩伟; 关键词：毒理学 L-02肝细胞三氯乙烯; 文献传递

血清蛋白质组分析方法筛选并鉴定TCE致L-02肝细胞损伤相关蛋白: 采用血清蛋白质组分析方法(SERPA)筛选并鉴定三氯乙烯(TCE)致肝细胞损伤相关特异蛋白。以40μmol/LTCE处理正常L-02肝细胞,提取总蛋白,分别利用TCE接触者血清、TCE中毒患者急性期血清和TCE中毒患者恢...; 刘建军邢秀梅黄海燕庄志雄何浩伟; 关键词：毒理学 L-02肝细胞三氯乙烯; 文献传递

高剂量三氯乙烯对L-02肝细胞中Rho GDIα表达的影响被引量：1: 2008年; 背景与目的:观察高剂量三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)对L-02肝细胞中Rho GDIα基因在mRNA及蛋白水平表达的影响。材料与方法:以β-actin为内参,采用蛋白印迹(western blot)和实时荧光定量RT-PCR技术对分别40μmol/L TCE(实验组)和DMSO(溶剂对照组)处理的正常L-02肝细胞中的Rho GDIα蛋白和mRNA水平进行检测。结果:高剂量TCE处理后Rho GDIαmRNA表达量显著下降而蛋白含量明显升高。结论:Rho GDIα基因表达在高剂量TCE处理后发生了特异性改变,为揭示TCE对机体的损伤作用机制提供了重要线索。; 邢秀梅张坚松刘建军席仁荣黄海燕; 关键词：三氯乙烯 RHO BLOT 实时定量RT-PCR

低剂量三氯乙烯诱导下谷胱甘肽转移酶Ω-1的表达变化: 2010年; 目的分析低剂量三氯乙烯(TCE)诱导的细胞兴奋效应时,谷胱甘肽转移酶Ω-1(GSTO-1)的表达变化。方法利用前期的双向电泳和质谱结果,参照前期兴奋效应的剂量设计,提取染毒细胞的mRNA和总蛋白,进一步使用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白水平上验证GSTO-1的表达变化。结果 Western blotting分析发现,0.1mmol/LTCE剂量组能诱导GSTO-1蛋白表达是对照组的2倍,但随着剂量的增加,蛋白表达改变不明显(与对照组相比,P<0.05)。RT-PCR结果提示:低剂量TCE能诱导GSTO-1基因表达增加,随着剂量的增加,表达反而有所减少。结论低剂量TCE能诱导GSTO-1基因及蛋白表达增加。; 黄海燕庄志雄刘建军席仁荣邢秀梅; 关键词：三氯乙烯

利用蛋白质组学技术研究三氯乙烯刺激肝细胞后蛋白质差异表达被引量：10: 2005年; 目的应用双向电泳及串联质谱技术,研究不同剂量三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞蛋白质表达谱的差异。方法L-02肝细胞分别用不同剂量TCE和溶剂对照(二甲亚砜)处理后,提取细胞总蛋白,双向凝胶电泳分离蛋白质组成分,银染显色,经ImageMaster2D Platinum5.0软件分组分析比较四组图谱,并对差异蛋白斑点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)分析鉴定。结果得出差异较明显的蛋白质斑点15个,不同剂量TCE刺激后表达分别上调、下调或消失,提示TCE可引起肝细胞蛋白表达发生改变。通过质谱鉴定和IPI human数据库检索,鉴定了其中9个TCE诱导L-02肝细胞相关的蛋白质。结论这些结果为深入研究TCE毒作用相关的蛋白质及TCE毒作用的分子标志物提供依据,并为阐明TCE毒作用的分子机制提供线索。; 刘建军黄海燕庄志雄李习艺袁建辉阳帆卫秦芝; 关键词：三氯乙烯肝细胞蛋白质组

三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析: 2006年; 目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1μmo.lL-1TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30μmo.lL-1TCE,刺激时间24 h。然后选取0,1,30和1+30μmo.lL-1TCE(1μmo.lL-1TCE预刺激12 h后,再次接受30μmo.lL-1TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定。结果1μmo.lL-1TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30μmo.lL-1TCE攻击产生的细胞毒性。与单独用30μmo.lL-1TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少。分析比较4组二维电泳图谱,发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B。结论TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护。; 刘建军黄海燕赵锦庄志雄袁建辉阳帆何建凡李习艺; 关键词：三氯乙烯肝细胞蛋白质组

蛋白质相互作用的研究方法被引量：17: 2009年; 随着基因组测序工程数量的增加,未知功能蛋白质测序工作也呈现指数式增长。生物学进程主要是由蛋白质执行和控制的,因此,阐明未知或已知蛋白质的生物学功能和从细胞水平上确定细胞机制,已成为蛋白质组学研究的主要目标。目前,随着酵母[1]、果蝇[2]、线虫[3]相互作用图谱的相继完成,蛋白质相互作用研究方法也不断发展和完善。综述了当前研究蛋白质相互作用的主要技术方法,包括酵母双杂交技术,GSTpull-down技术,免疫共沉淀技术和串联亲和纯化技术等多种研究方法,分析了各种技术方法的优缺点以及各种方法的改进,在试验中可根据不同的要求和目的选择适宜的方法。; 陈谋通刘建军; 关键词：蛋白质相互作用酵母双杂交

带TAP标签的癌蛋白SET真核载体的构建及其表达被引量：1: 2009年; 背景与目的:为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建带串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1/SET-TAP。材料与方法:从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增SET基因,从质粒中扩增得到TAP基因,采用重叠PCR法将基因SET与TAP连接成SET-TAP,双酶切后纯化序列定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)并转化E.coli DH5α,取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,重组质粒瞬时转染L-02肝细胞进行表达,Real Ti me-PCR和Western blotting检测融合蛋白的表达。结果:经双酶切和DNA测序鉴定,证实pcDNA3.1/SET-TAP真核表达载体构建成功,将该载体转染L-02细胞后,融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论:该结果为研究SET在三氯乙烯致肝细胞毒性的蛋白质相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机制奠定了基础。; 周丽陈谋通刘建军房师松黄海燕袁建辉徐新云; 关键词：三氯乙烯重叠PCR 串联亲和纯化

SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达: 目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体（EGFP）的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和KpnⅠ酶切位点的引物。从人L-0...; 周丽席仁荣刘建军邢秀梅黄海燕; 关键词：蛋白磷酸酶2A; 文献传递

靶向Annexin A3短发夹环RNA干扰载体的构建及鉴定被引量：1: 2008年; [目的]利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术构建和鉴定膜联蛋白A3(Annexin A3)的真核表达载体,为进一步研究Annexin A3在肝细胞中的功能奠定基础。[方法]人工合成3对shRNA序列,退火后定向克隆到真核表达载体psiRNA-hH1neo上,采用酶切和测序法鉴定。[结果]质粒酶切及测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致。[结论]成功构建膜联蛋白A3靶向的真核表达载体。; 席仁荣刘建军吴振强邢秀梅黄海燕; 关键词：ANNEXIN A3 RNA干扰真核表达载体

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