广东省自然科学基金(S2011010004076)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 建立高效液相色谱-串联质谱检测细胞内腺苷酸浓度的方法及其应用被引量：1
- 2013年
- 细胞内腺苷酸浓度变化是细胞能量代谢改变的感应器,建立高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内腺苷酸浓度的方法有助于监测药物对细胞能量代谢的影响.用含有Na-EDTA的高氯酸溶液超声裂解细胞.采用超高效HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以8 mmol/L N,N-二甲基己胺(DMHA)水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用正离子模式质谱检测,在多反应监测(MRM)模式下进行定性定量分析.结果表明,AMP、ADP和ATP分别在(0.1814～14.5164)μmol/L、(0.2342～18.7354)μmol/L和(0.2003～16.0260)μmol/L线性范围内具有良好的线性关系,其相关系数分别为0.9984、0.9964和0.9990.AMP、ADP和ATP的检出限(LOD,S/N>3)分别为1.9291、1.8794和166.5 nmol/L,定量限(LOQ,S/N>10)为1.9632、1.9672和185.6 nmol/L,且加标回收率为81.8%～107.8%,相对标准偏差小于7.55%.AMP、ADP和ATP的日内偏差(RSD)分别为6.16%、5.13%和7.66%,日间偏差(RSD)分别为6.36%、2.74%和6.77%.该方法快速、简单、灵敏,能满足细胞内AMP、ADP和ATP含量的检测要求.通过检测分析在不同浓度高良姜挥发油作用下人肺癌A549细胞内AMP、ADP和ATP含量变化,结果显示细胞总的腺苷酸水平和能荷呈浓度依赖性下降,且当浓度达到500 mg/L时ATP/TAN明显下降,而A549细胞中AMP/ATP比例水平呈浓度依赖性增加.这提示高良姜挥发油可通过影响细胞能量代谢抑制细胞增殖.
- 李宁张海涛罗辉张良滔熊勇贾振斌
- 关键词：高效液相色谱-串联质谱腺苷酸能量代谢高良姜
- 死亡相关蛋白激酶(DAPK)是负调控还是正调控自噬？(英文)被引量：2
- 2012年
- 自噬(autophagy)是1个严谨调控的代谢途径.哺乳动物细胞通过自噬能够降解和循环利用大分子和某些细胞器.自噬作为一种适应的机制,保护有机体对抗各种病理病变,包括感染、癌症、退行性病变、衰老和心脏疾病等.在移除蛋白聚集体、以及受损或过剩细胞器时,自噬发挥着很关键的作用,从而能够维持细胞能量平衡并适应环境压力.当自噬不足或过剩时,自噬也可作为一种促死亡的机制.在不同的情况下,自噬活化的程度通过自噬信号通路网络而精确地调节.死亡相关蛋白激酶(DAPK)是1个刺激调节蛋白激酶,它由几个功能结构域组成.这些结构域能让它参与广泛的信号通路中,包括凋亡、自噬和膜泡.DAPK在调节自噬中发挥着关键的作用.本文综述了在不同的情况下DAPK负调控或是正调控自噬的路径.
- 文敏张海涛
- 关键词：自噬死亡相关蛋白激酶磷脂酰肌醇-3-激酶BECLIN-1
