国家质检总局科技计划项目(200910140-03)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：中国人民解放军后勤工程学院后勤工程学院更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生更多>>
- 环境水体中空肠弯曲杆菌荧光定量PCR快速检测方法的研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立一种环境水体中空肠弯曲杆菌的荧光定量PCR准确快速方法。方法采用膜吸附-洗脱法浓缩富集环境水体中的空肠弯曲杆菌,根据空肠弯曲杆菌VS1基因序列设计引物,以构建的空肠弯曲杆菌重组质粒作为标准品,建立空肠弯曲杆菌荧光定量PCR检测方法。结果荧光定量PCR反应体系在2.66×109～2.66×100copies/μl拷贝数模板量的线性范围内,所获得回归方程线性关系较好(R2=0.998),扩增曲线呈S形指数增长;特异性检测中肠炎沙门氏菌等对照菌扩增呈阴性,对于空肠弯曲杆菌纯培养物检测限达到46 cfu/ml,实际水样检测结果与常规生化鉴定结果一致,整个检测过程可以在4 h内完成。结论本研究中建立的空肠弯曲杆菌荧光定量PCR检测方法具有准确、简便、快速等特点,具有较强的实际应用价值,可以用于环境水体中空肠弯曲杆菌的检测。
- 王大勇方振东谢朝新刘玉通
- 关键词：环境水体空肠弯曲杆菌荧光定量PCR
- 轮状病毒荧光定量PCR标准品的构建被引量：5
- 2013年
- 采用MA104细胞系培养和T载体克隆技术,在轮状病毒结构蛋白VP4基因序列中设计合成引物,经过PCR扩增后将特异性产物与pMD-19-T载体连接,对获得的轮状病毒重组质粒标准品进行酶切鉴定和测序分析。利用常规PCR和荧光定量PCR方法对获得的重组质粒标准品进行特异性和灵敏度指标的检验。结果表明,将构建的重组质粒作为标准品制备标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系(斜率为-4.015,R2=0.991);荧光定量PCR熔解曲线分析表明,85.8℃的PCR产物是轮状病毒VP4基因序列的特异性产物,该标准品具有轮状病毒特异性;同时,所制备的重组质粒标准品在荧光定量PCR检测中具有较大的线性范围(5×101~5×1010拷贝/μL),每个梯度PCR反应最低可以检测到50拷贝的重组质粒,因而采用该标准品进行荧光定量PCR分析具有较高的检测灵敏度;此外,该重组质粒标准品具有较高的稳定性和重复性,3次独立实验的变异因数Cv<1.5%。构建的重组质粒标准品可以用做环境水体中轮状病毒的荧光定量PCR标准品。
- 王大勇方振东谢朝新刘玉通
- 关键词：轮状病毒重组质粒克隆标准品荧光定量PCR
