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Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果被引量：5: 2010年; 目的分析蛋白A/G亲和层析柱在纯化抗HCV血清的影响因素,以便选择最佳使用条件提高ProteinA/G亲和柱的利用效率。方法分别将抗HCV血清用不同处理方式、不同上样方式、不同使用次数的亲和柱进行纯化,并收集纯化样品进行检测、分析。结果用饱和硫酸铵粗纯后,在蛋白A/G亲和层析柱的纯化效果更好;样品在亲和柱内吸附30min可提高亲和柱的对目的蛋白的吸附。结论使用初纯的抗体并增加吸附时间能提高亲和层析柱的利用率,并有效延长亲和柱的使用寿命。; 杨蓉谢忠平龙润乡白惠珠谭振国王燕吴忠香张勇; 关键词：PROTEIN 抗体纯化丙型肝炎病毒

免疫复合物解离剂的研究及在HCV抗原检测中的应用效果分析被引量：2: 2012年; 目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳性率进行统计分析。结果 160 EU/ml的HAV抗原能被效价为20 U/ml的HAV抗血清完全中和;只单独使用去垢剂对免疫复合物无解离效果;0.1 mol/LGly-HCL能解离抗原抗体复合物,加入1种或几种去垢剂后则其解离效果有不同程度的提高,其中以Gly-HCl+7%TritonX-100+5%CHAP的效果最好(q=27.177,P<0.01);免疫复合物在加入解离剂后在室温60 min、37℃30 min、60℃10 min为本试验较好的解离条件,其中以37℃30 min效果最佳;应用Gly-HCl+5%CHAPS+7%TritonX-100在37℃对样品进行预处理30 min后,可使HCV抗原阳性检出率由解离前的33.3%提升至75.56%,解离前后之间的阳性率差异具有显著地统计学意义(χ2=32.34,P<0.01)。结论酸化剂能将HAV及HCV抗原抗体免疫复合物解离,添加去垢剂后,解离效果好于单独使用酸化剂,且联合添加好于单独添加。; 杨蓉龙润乡李华谭振国白惠珠杨婷蒋蕊鞠谢忠平; 关键词：甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒抗原抗体复合物解离抗原检测

HCV游离抗原BA-ELISA检测方法的临床应用评价: 2013年; 目的根据国家相关法规对HCV游离抗原BA-ELISA检测方法进行临床应用效果评价。方法生物素标记丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立HCV游离抗原BA-ELISA检测法,分别在3个省级医疗卫生机构进行临床试验,同时使用HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA荧光定量检测试剂盒进行对比同步检测。结果临床试剂与HCV-Ab检测结果相比一致性66.67%,特异性100%;与荧光定量PCR相比结果一致性为80.85%、特异性为98.87%;同类市售产品HCV核心抗原检测试剂检测结果与之接近。结论临床试剂特异性较好,灵敏度有待提高;临床研究试剂比市售同类产品阳性检出率略高,但两种试剂检出率均低于核酸及抗体检测试剂。; 龙润乡陈红英朱祥明沈云松孙翳苏品璨王俊谢忠平; 关键词：酶联免疫法

HCV多表位复合抗原基因表达条件的探索: 2012年; 目的:筛选出适合HCV多表位复合抗原基因(PCX)表达的菌株,优化表达条件,并进行目的蛋白的免疫特异性的检测。方法:将含HCV多表位复合抗原基因的重组质粒pWR450-PCX转入大肠杆菌DH5α、TOP10F′、BL21菌株中,在不同培养基中,经不同浓度IPTG诱导不同时间,表达融合蛋白(GZ-PCX),并利用患者阳性血清通过Western Blot检测其免疫特异性。结果:重组质粒在DH5α、TOP10F′菌株中均能表达有一定免疫特异性的目的蛋白,但BL21中不表达;目的蛋白在TB培养基中的表达量明显高于LB培养基。结论:在37℃,IPTG浓度为1mM诱导3h时,目的蛋白的表达量达到峰值;所制备的抗原具有一定的免疫特异性和免疫原性。; 杨蓉杨婷李华龙润乡董承红董丽娟谢忠平; 关键词：丙型肝炎病毒原核表达免疫原性

HCV抗原ABS-ELISA检测方法的建立及初步评价被引量：6: 2012年; 目的建立新的HCV抗原生物素-亲和素-酶联免疫检测方法(ABS-ELISA)。方法将生物素-亲和素系统与酶联免疫技术相结合,建立用于丙型肝炎病毒抗原检测的方法,分析检测方法的灵敏度、特异度、稳定性及精确度等主要技术指标,并对应用效果进行评价。结果建立的检测方法,对40余种肠道病毒样品均无交叉反应,在第二代HCV-RNA国家标准品的10份阴性标准品中,未检出HCV-Ag阳性样品,在10份HCV-RNA阳性标准品中,检出6份HCV-Ag阳性的样品,表现出良好的特异性;检测试剂CV平均值为6.28%,精密性好;在90份HCV抗体阳性样品中检测出HCV-RNA样品67份(74.44%),检出HCV游离抗原阳性样品30份(33.33%)、HCV总抗原阳性样品68份(75.56%),HCV游离抗原与HCV-RNA两个指标检出率差异有统计学意义(χ2=22.443,P﹤0.01),但HCV总抗原与HCV-RNA检测结果之间差异无统计学意义(χ2=0.037,P﹥0.05);以HCV-RNA检测试剂为金标准,所建立的ABS-HCV抗原检测试剂总抗原检测结果的一致性、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为98.03%、80.60%、98.93%、79.41%、99.00%。结论新建立的HCV抗原ABS-ELISA检测方法特异性好,其灵敏度与荧光定量PCR相近。; 谢忠平龙润乡杨蓉杨蓉白惠珠李华易红昆白惠珠; 关键词：丙型肝炎病毒抗原酶联免疫吸附生物素

丙型肝炎病毒分片段抗体检测及优势抗原表位分析被引量：2: 2010年; 目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。; 谢忠平杨蓉龙润乡李华白惠株廖云蒋蕊鞠王燕洪超; 关键词：丙型肝炎病毒

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云南省联合支持国家计划项目(2008GA008)