贵州省科技厅农业攻关项目(NY[2010]3085) 作品数:4 被引量:7 H指数:2 相关作者: 余波 徐景峨 谭诗文 史开志 冉懋韬 更多>> 相关机构: 贵州省畜牧兽医研究所 更多>> 发文基金: 贵州省科技厅农业攻关项目 贵州省畜禽健康养殖技术创新能力建设项目 中央补助地方科技基础条件专项基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制 被引量:4 2013年 根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7 N基因、猪乙型脑炎病毒(JEV)NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV 0.2 ng/L、JEV 0.4 ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。 余波 谭诗文 冉懋韬 徐景峨 史开志 杨丽娟关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR诊断方法的建立 被引量:1 2014年 根据Gen Bank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列设计特异性引物,PCR扩增获得猪圆环病毒2型ORF2基因片段,并克隆到p MD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR Green I荧光定量PCR反应条件的优化,建立了猪圆环病毒2型的SYBR Green I荧光定量PCR诊断方法。扩增产物的溶解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,对PRV、PPV、E.coli、CSFV、PRRSV均无阳性信号,可重复性好,测灵敏度可达4.0×101拷贝/μL。结果表明,建立的猪圆环病毒2型SYBR Green I实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好,适合于猪圆环病毒2型临床样品的检测。 余波 周思旋 谭诗文 徐景峨 史开志 杨莉关键词:猪圆环病毒2型 ORF2基因 SYBR 猪伪狂犬病毒与弓形虫、附红细胞体混合感染的诊治 2015年 为了对贵阳某种猪场病死猪群的病因进行确诊,试验采用观察临床症状、病理变化及PCR和RT-PCR等实验室检测方法对其进行诊治。结果表明:病死猪群的肺脏、心耳、肝脏等多处发生病变,PCR方法扩增出伪狂犬病毒特异性条带,RT-PCR方法未扩增出猪瘟、蓝耳病病毒特异性条带,弓形虫IHA抗体检测的阳性率为50%(6/12),染色镜检可见附红细胞体及弓形虫速殖子。说明病死猪群为猪伪狂犬病毒、附红细胞体与弓形虫混合感染。 徐景峨 姜玲玲 史开志 肖芳萍 周思旋 余波关键词:伪狂犬病毒 附红细胞体 弓形虫 病理变化 诊治 猪圆环病毒2型LAMP诊断方法的建立及初步应用 被引量:2 2014年 根据GenBank中的猪圆环病毒2型ORF2基因序列,设计合成2对引物,通过对环介导等温(LAMP)扩增条件的优化,敏感性、特异性试验,成功建立了猪圆环病毒2型LAMP诊断方法。敏感性结果显示,建立的LAMP诊断方法最低核酸检测量为0.30 pg/L,而PCR诊断方法最低核酸检测量为30 pg/L;特异性结果显示,猪圆环病毒1型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒的扩增结果均为阴性。对95份自然感染病猪样品的检测结果表明,该LAMP方法检测结果与PCR检测结果符合率为95.8%。整个扩增反应可在30 min内完成,结果肉眼可见,为猪圆环病毒2型的现场快速诊断提供了一种简便可行的方法,能够满足基层现场快速检疫的需要。 余波 冉懋韬 徐景峨 谭诗文关键词:猪圆环病毒2型 ORF2基因 环介导等温扩增