国家自然科学基金(30671984)
- 作品数：30 被引量：100H指数：5
- 相关作者：邵启祥焦志军彭鑫申卫红许逊更多>>
- 相关机构：江苏大学江苏大学附属医院北京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程军事更多>>
- MicroRNA-34a检测方法的建立及其在类风湿性关节炎中的应用被引量：1
- 2010年
- 目的采用自行设计的颈环结构引物，建立外周血检测microRNA-34a（miR-34a）的检测方法，并初步应用于类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者外周血单个核细胞（peripheral blood monocytes，PBMCs）样品的检测。方法用TRlzol提取外周血单个核细胞的总RNA，以颈环结构的RT引物逆转录出相应的cDNA，然后以miR-34a的PCR引物进行PCR检测，电泳观察结果。结果建立的颈环RT—PCR能正确检测miR-34a。在RA患者外周血中检测到miR-34a的表达，其中初发者栓出率较高（2／6），复发者检出率为（1／9）；而健康志愿者外周血和治疗好转者未见表达。结论成功建立检测miR-34a的方法，miR-34a检测可能对RA的诊断有一定意义，但尚需进一步深入研究。
- 陈晓旦刘秀雯吴琳成静阴晴李晶吴忠钱晖许文荣邵启祥
- 关键词：MIR-34A逆转录聚合酶链反应类风湿性关节炎
- 类风湿性关节炎患者CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞检测及意义被引量：18
- 2007年
- 目的:研究CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞在类风湿关节炎患者(RA)外周血中的比例改变,并探讨其在疾病进程中的意义。方法:选取活动期及稳定期RA患者,采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和 mRNA水平检测FoxP3表达,并与正常人进行比较。结果:RA患者CD4和CD25双阳性细胞所占比例与对照组没有明显差异,而活动期患者外周血CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+细胞明显低于稳定期和对照组(P<0.05)。FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致。结论:类风湿性关节炎活动期时CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了类风湿性关节炎的病理进程。
- 焦志军尤海燕陈蕾汪毅阴晴邵启祥
- 关键词：流式细胞术调节性T细胞FOXP3类风湿性关节炎
- 大鼠颈部心肺联合移植模型的建立被引量：1
- 2008年
- 目的：建立一种操作简单、可行的大鼠异位心肺联合移植模型，以利于移植排斥反应机制的研究及其实验性治疗研究。方法：分离受体Wistar大鼠颈部并形成皮囊，提供容受供体心肺的空间，分离颈总动脉。供体经过肝素化后，在0～4℃条件下取心肺，并作适当修剪，最后在0～4℃条件下将心肺供体SD大鼠的主动脉与受体Wistar大鼠的颈总动脉行端侧吻合，并进行心肺复苏。结果：心肺联合移植正式手术50例，手术后通血复跳率96％。手术时间为（70±10）min，平均冷缺血时间为（40±10）min。手术主要并发症是动脉吻合口狭窄及出血，血栓形成，失血性休克。未作任何处理的移植心肺3天存活率82％。结论：成功建立了大鼠颈部心、肺联合移植模型。
- 陈述舒新军徐三荣邵启祥
- 原核表达的含PTD-eGFP不同分子质量融合蛋白穿膜能力的比较被引量：1
- 2009年
- 目的:评价HIV-1 TAT蛋白转导结构域(PTD)携带的不同分子质量融合蛋白的穿细胞膜能力。方法:诱导表达、纯化含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白,与细胞共育后,通过流式细胞术、激光共聚焦评价融合蛋白穿膜能力。结果:诱导表达、纯化获得3种含PTD-eGFP的不同分子质量的融合蛋白。流式细胞术和激光共聚焦方法分析发现3种融合蛋白均具有高效穿膜能力。结论:PTD介导融合蛋白的穿膜能力与分子质量无直接关系。
- 田雨香许逊蔺昕陈勋宗扬勇招倩倩季宝菊王胜军许化溪邵启祥
- 关键词：蛋白转导结构域增强型绿色荧光蛋白分子质量
- 类风湿性关节炎患者外周血TH17细胞测定被引量：5
- 2008年
- 目的探讨新的效应T细胞TH17在类风湿性关节炎（RA）患者外周血的分布及意义。方法选取PHA或PMA＋Ion作为刺激剂，建立流式细胞术胞内细胞因子染色的方法，应用该方法检测了35例活动期、30例稳定期RA患者及正常人外周血TH17和TH1细胞百分率。结果PMA＋Ion联合刺激的效果优于PHA。RA患者及正常人T细胞经PMA＋Ion刺激后，CD3^＋CD8^＋T细胞IL-17表达水平较相应未刺激组显著增加（P〈0．05）。而不论是否加刺激剂，活动期RA患者外周血CD3^＋CD8^＋IL-17^＋细胞明显多于稳定期，二者均多于正常对照组（P〈0．05）。RA患者外周血TH1细胞呈现与TH17细胞类似的分布特点。结论活动期RA患者外周血存在TH17细胞的分布异常，TH17细胞可作为评价RA患者细胞免疫功能状态的新指标。
- 焦志军王文红尤海燕陈蕾汪毅李晶邵启祥
- 关键词：TH17细胞类风湿性关节炎流式细胞术
- 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型EL/4细胞系的建立
- 2011年
- 目的:建立稳定的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase,HG-PRT)缺陷型EL/4细胞系,为小鼠T细胞杂交瘤的制备奠定基础。方法:通过乙基甲磺酸(ethyl methanesulfonate,EMS)提高EL/4细胞的基础突变率,用8-氮杂鸟嘌呤(8-Azaguanine,8-AG)从5μg/ml到80μg/ml浓度逐渐筛选出对8-AG有稳定抗性的细胞株EL/4,并对其生物性状与基因表型进行鉴定。结果:通过筛选获得能够耐受高浓度(80μg/ml)8-AG的EL/4细胞,并能长期在20μg/ml 8-AG培养液中正常生长,但不能耐受次黄嘌呤-氨甲蝶呤-胸腺嘧啶(hypoxanthine-aminopterin-thymidine,HAT)培养基(3 d全部死亡),RT-PCR未能从该EL/4细胞中检测出HGPRT基因的表达,由此可见该EL/4细胞的HGPRT基因发生突变或者缺失。将该细胞经克隆后获得单克隆细胞株,并命名为突变的EL/4(mutant EL/4,mEL/4)。该细胞株能与磁珠分离的小鼠脾脏来源的CD4+T细胞在PEG作用下顺利进行融合。结论:成功建立了HGPRT缺陷型EL/4细胞系mEL/4,为制备T细胞杂交瘤奠定了基础。
- 龚文禚娅蒋砚秋潘晓园邵启祥
- 关键词：突变
- 多西环素作用前后小鼠胸腺上皮细胞蛋白质表达谱的变化
- 2011年
- 目的:探讨多西环素(doxycycline,Dox)作用前后小鼠胸腺上皮MTEC1细胞系蛋白质表达谱的差异,为阐明多西环素对胸腺细胞作用的机制奠定基础。方法:利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析H4和WCX2芯片捕获的多西环素作用前后差异蛋白表达谱,然后利用蛋白质序列数据库搜索和分析表达改变的蛋白。结果:SELDI-TOF蛋白芯片中H4芯片捕获了13种表达增高蛋白,5种蛋白表达降低。WCX2芯片捕获了14种表达增高蛋白,4种蛋白表达降低。共有5种蛋白在两种芯片中均显示表达增高,其中与细胞增殖和凋亡有关的蛋白为硫氧还原蛋白(thioredoxin,Trx)。结论:多西环素对MTEC1细胞的蛋白表达具有调控作用,有可能促进MTEC1细胞抵抗凋亡。
- 禚娅刘慧蒋砚秋何大澄陈慰峰邵启祥
- 关键词：多西环素蛋白质芯片
- 带PTD的小鼠Foxp3 PRD缺失突变体对小鼠脾混合淋巴细胞反应的影响
- 2009年
- 目的:构建和表达带蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)的Foxp3(forkhead boxP3)PRD缺失突变体(PTD-ΔPRD)融合蛋白,并探讨其对脾混合淋巴细胞反应的影响。方法:应用PCR技术扩增获得小鼠ΔPRD片段核酸序列,将其分列插入到带PTD的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用镍柱获得并复性融合蛋白;Western印迹鉴定目的蛋白表达的正确性、流式细胞术和Western印迹检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力、双向混合淋巴细胞反应分析融合蛋白对T淋巴细胞增殖的影响。结果:融合蛋白可在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,并获得了大量纯化的融合蛋白。流式细胞术和Western印迹显示融合蛋白穿越细胞膜进入EL-4细胞核中,混合淋巴反应初步证明融合蛋白具有抑制T淋巴细胞增殖的功能。结论:成功表达小鼠PTD-ΔPRD Foxp3融合蛋白,该融合蛋白能有效进入细胞核内,抑制T淋巴细胞增殖。
- 申卫红刘静彭鑫宗杨勇许逊邵启祥
- 关键词：蛋白转导结构域FOXP3
- Foxp3在免疫系统中的作用研究进展
- 2007年
- 黄莉莉邵启祥
- 关键词：FOXP3自身免疫耐受T细胞
- mLumin转染人肝癌HepG2细胞系的建立被引量：1
- 2011年
- 目的:建立mLumin+的HepG2细胞系,为进一步建立肿瘤模型和小动物荧光成像观察奠定基础。方法:采用磷酸钙法,将pcDNA3.0-mLumin质粒转染至人肝癌细胞系HepG2,经G418筛选扩增后通过PCR检测mLumin基因在转染的肝癌细胞HepG2中的表达情况,同时应用荧光显微镜及流式细胞仪检测mLumin+的HepG2细胞比例,最终将其接种于裸鼠的皮下,观察致瘤情况。结果:RT-PCR鉴定证实肝癌细胞HepG2中有mLumin基因的mRNA表达。在倒置荧光显微镜下,采用绿光(540 nm)激发时,可以见到大量的发射红色荧光的细胞,流式细胞术检测有50%的阳性率。小动物活体成像仪显示裸鼠皮下接种能够成瘤,组织冰冻切片也证实HepG2细胞中有大量mLumin蛋白表达。结论:成功建立了mLumin+的HepG2细胞,为进一步进行肿瘤的基础和应用研究奠定了基础。
- 刘霞闫美娜王荟万洋洋许凤姣邵青成静范兴文石慧娜邵启祥
- 关键词：HEPG2活体成像
