国家科技部农业科技成果转化资金(2011GB23260003)
- 作品数：3 被引量：23H指数：3
- 相关作者：张鑫陈建飞冯力石达时洪艳更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技部农业科技成果转化资金哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 抗猪传染性胃肠炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位的鉴定被引量：6
- 2014年
- 为制备抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达系统表达重组N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,经4次细胞克隆纯化后,获得两株稳定分泌抗重组TGEV N蛋白的MAb,命名为3D7和5E8。通过western blot和间接免疫荧光试验对MAb的免疫活性和特异性进行鉴定,结果表明两株MAb均能够与TGEV全病毒反应并且特异性良好。利用合成的多肽对N蛋白抗原表位进行鉴定,初步确定MAb 3D7识别的表位为241AGKGDVTRFYGARSSSANFG260;5E8为184NKKDDSVEQAVLAALKKLGV203。本研究制备了两株MAb并对其表位进行鉴定,为TGEV检测方法的建立和N蛋白功能的分析奠定了基础。
- 赵鑫张鑫时红艳陈建飞迟延彬韩斆李长龙刘宁胡桂学冯力
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒单克隆抗体抗原表位
- 2011年～2012年G9型猪轮状病毒流行病学调查及VP7基因遗传进化分析被引量：14
- 2013年
- 为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV阳性份数为39,阳性率为7.34%;而在检测的121个猪场中,共有23个猪场显示阳性,猪场阳性率为19%。VP7基因全长1 062 bp,含有一个982 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与参考病毒株VP7全长基因核苷酸比较,同源性为91.5%～99.3%。在31 nt、56 nt、75 nt、82 nt、191 nt、215 nt等位置均存在点突变,无插入和缺失。核苷酸系统发育进化树表明:黑龙江省哈尔滨市、桦南、绥化,辽宁省大连市、内蒙古自治区采集病料样品的基因间差异较小,与采集自中国广西、浙江、贵州、北京的病料样品基因相比差异性较大,这表明VP7基因存在地域差异。
- 王璐时洪艳陈建飞张鑫史楠石达刘随新张莎冯力
- 关键词：轮状病毒VP7基因
- A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 试验旨在制备A群G11血清型猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白的单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。将A群G11血清型PoRVVP7基因克隆至pGEX-6P-1载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化融合蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞并进行有限稀释法克隆化筛选。经3次筛选,最终得到1株能与GST-VP7蛋白反应的特异性、稳定分泌抗体的阳性细胞克隆。Western blotting鉴定结果显示该单克隆抗体具有良好的免疫原性及特异性;MTT法中和试验结果显示其具有中和活性;分泌的单克隆抗体亚型为IgG2b。本试验结果表明A群PoRV VP7蛋白在大肠杆菌中成功表达且制备了单克隆抗体,可用于PoRV VP7蛋白结构和功能的研究,也为猪轮状病毒病的预防、诊断和治疗等研究奠定基础。
- 迟延彬陈建飞时洪艳张鑫石达李长龙韩斅陈洪岩冯力
- 关键词：VP7基因单克隆抗体
