国家自然科学基金(39900003)
- 作品数：3 被引量：35H指数：3
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- 相关机构：湖北大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金武汉市科技攻关计划项目湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 酸性木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达被引量：10
- 2005年
- 运用“鸟枪法”克隆构建了环境微生物的基因组文库,并从中筛选得到一个酸性木聚糖酶基因,命名为xyl3,其在GenBank中的登录号为gb:AY300805。BLAST分析表明,该基因的序列同源性很低,其中仅存在很短的木聚糖酶基因的同源片段,其编码的木聚糖酶属于G lycosyl hydrolases fam ily 10,与来源于Geobacillus stearotherm ophilus的intra-cellu larxylanase在氨基酸水平具77%同源性。该基因经T4 DNA polym erase处理后,克隆至经限制性内切酶CpoⅠ和NotⅠ双酶切后的毕赤酵母表达载体pHBM905,获得重组质粒pHBM706。此重组质粒转化毕赤酵母GS115,经含有交联木聚糖的选择性培养平板和PCR扩增鉴定筛选得到重组毕赤酵母GS115(pHBM706)。以0.5%甲醇于28℃诱导产酶,测得重组毕赤酵母GS115(pHBM706)在诱导的第36h产酶达最高值,所产粗酶液酶活为0.177 IU/mL。该酶的最适反应pH为5.5,最适反应温度为50℃。
- 李春华李翔马立新
- 关键词：基因组文库木聚糖酶毕赤酵母
- 枯草芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 2002年
- 本研究用鸟枪法构建了枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)HB0 0 2的基因组文库 ,经平板法筛选得到了六株能水解合成底物对 硝基苯 α D 葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆 ,经鉴定均含克隆了寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶基因的重组质粒 (命名为pHBM0 0 1～pHBM0 0 6 )。选择pHBM0 0 3 ,对其插入片段测序分析 ,此片段内有一编码 5 6 1个氨基酸的开放阅读框 ,该蛋白质的计算分子量为 6 5 985kD。HB0 0 2的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶的氨基酸序列与Bacillussp .和凝结芽孢杆菌 (Bacilluscoagulans)的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶的氨基酸序列一致性分别为 81 %、6 7% ,相似性分别为 89%、79%。从pHBM0 0 3中扩增出寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶基因 ,克隆到pBV2 2 0上 ,转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)DH5α ,得到三个能水解对 硝基苯 α D 葡萄糖吡喃糖苷的阳性克隆HBM0 0 3 1～HBM0 0 3 3 ,将此三个菌株热诱导表达 ,SDS PAGE电泳可检测到特异表达的蛋白质 ,其中HBM0 0 3 1、HBM0 0 3 2表达的蛋白约 6 6kD ,为完整的寡聚 1 ,6 葡萄糖苷酶 ,而HBM0 0 3 3表达的蛋白质偏小 ;表达的蛋白质均有寡聚 1 ,6
- 蒋思婧马立新
- 关键词：枯草芽孢杆菌基因表达
- 短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究被引量：19
- 2003年
- 将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )、GS115 (pHBM2 2 0 )、SMD116 8(pHBM2 2 0 )分别诱导产酶 ,对重组酶进行相关的酶学性质分析表明 ,三者的最适反应pH值约为 5 5 ,最适反应温度约为 6 0℃。在其最适反应条件下测得三者粗酶液酶活分别为 10 80IU mL ,11 6 3IU mL ,9 6 8IU mL。重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )所产酶的热稳定性较好 ,而在pH稳定性方面三者没有太大的差异。
- 江正兵宋慧婷马立新
- 关键词：短小芽孢杆菌木聚糖酶基因分泌表达酶学性质毕赤酵母
