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仅采用PCR进行分子克隆的方法探索被引量：4: 2014年; 目的针对目前各种费时且易失败的克隆方法和价格昂贵的试剂盒等问题,对一种仅采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分子克隆方法进行了探索。方法利用高保真的DNA聚合酶具有3’-核酸外切酶活性的特点,采用PCR把载体和插入片段扩增出来,二者的扩增产物先加限制性内切酶Dpn I后再按一定比例混合来消化甲基化的DNA模板,最后把Dpn I消化产物直接转化到感受态细胞来得到克隆基因。结果是一种简单、高效、可靠、且仅采用PCR的分子克隆方法,并利用此方法成功地把构建在载体p ET上的α-突触核蛋白全长基因和构建在p CDNA3.1上的乙酰胆碱受体亚基的全长基因分别重新构建在载体p GEX-4T-1和p GEMHE上。结论在PCR扩增时能够通过引物设计来确定克隆位点,所以该方法可以把任何DNA片段插入到质粒载体内的任何位置,而不需要考虑载体多克隆位点限制的问题。此外,该方法省去了传统的酶切消化、纯化回收和连接过程。; 薛奋勤许晴魏华李华薛冰; 关键词：分子克隆聚合酶链反应 DNA聚合酶

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国家自然科学基金(31271136)