国家重点基础研究发展计划(2011CB710802)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：苏晨曾苏余露山姚彤炜宋洁更多>>
- 相关机构：浙江大学江南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：生物学理学化学工程更多>>
- 疏水离子液体中生物不对称还原制备手性醇
- 2015年
- 针对近平滑假丝酵母全细胞不对称还原2-羟基苯乙酮制备光学纯(R)-苯基乙二醇反应中底物的质量浓度、产量及质量平衡低的问题,运用多相萃取生物转化的原理,比较不同非水介质对不对称还原反应效率的影响,构建具有良好生物相容性和高质量平衡的水/疏水离子液体1-丁基-3-乙基咪唑六氟磷酸盐([BEIM]PF6)双相反应体系。考察该体系下辅助底物种类、辅助底物用量、底物质量浓度、催化剂用量、离子液体比例、p H和反应温度对生物催化反应的影响,通过正交试验设计和响应面法优化不对称还原2-羟基苯乙酮的反应条件,在最优反应条件下,产物质量浓度、产率和质量平衡得率分别达到15.35 g/L、76.8%和84.3%,产物的对映消旋值(e.e.值)大于99.9%。
- 宋洁穆晓清王栋徐岩
- 关键词：全细胞离子液体
- 重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达被引量：1
- 2013年
- 目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605 nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性。结果成功构建了表达质粒pET28a-rHao2(β1)和pET28a-rHao2(β2),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,其对2-羟基辛酸的Km分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2)μmol.L-1;对2-羟基异己酸的Km分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6)μmol.L-1。结论成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型。
- 苏晨余露山姚彤炜曾苏
- 关键词：克隆
