博士科研启动基金(SB08200602) 作品数:8 被引量:30 H指数:3 相关作者: 王鸣刚 陈亮 吴亦亮 赵宏 李志忠 更多>> 相关机构: 兰州理工大学 厦门大学 龙岩学院 更多>> 发文基金: 博士科研启动基金 甘肃省教育厅研究生导师科研项目 甘肃省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
AtPCS1基因表达载体构建与转化苜蓿的研究 被引量:9 2011年 扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)螯合肽合成酶(AtPCS1)全长基因;构建AtPCS1植物表达载体pBⅠ121-AtPCS1,进一步转化农杆菌EHA105;利用转化的农杆菌EHA105侵染甘农一号苜蓿(Medicago sativa)叶片,经过80~100 d的筛选与培养,获得57株再生转基因植株。随机抽取其中9株进行PCR检测,其中6株为阳性。初步结果表明,AtPCS1基因已整合到苜蓿基因组中。 王鸣刚 骆换涛 李志忠 吴亦亮关键词:苜蓿 植物表达载体 利用rbcL基因序列比对分析广西优质红锥种质资源的遗传多样性 被引量:3 2008年 通过PCR扩增得到10个红锥品系的rbcL基因全序列,均为1.513 kb.核苷酸序列比对结果表明,在256-1 455 bp区间10个红锥品系共有16处碱基发生变异,变异率为1%,其中在306 bp和634 bp处10个红锥品系较同属对照castanopsis lucida均发生相同的变异,可以看作属内进化信息碱基.对表达的氨基酸序列进行比对分析,发现16处碱基变异共引起8处氨基酸序列变异. 王鸣刚 肖岸容 赵宏 李志忠 王蕾 陈亮关键词:红锥 AtPCS1基因的原核表达及多抗血清的制备 被引量:2 2008年 利用RT-PCR扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列,构建原核表达载体pET28a- AtPCS1并测序.将该载体转化大肠杆菌BL21,用0.75 mmol/LIPTG诱导融合蛋白AtPCS1-His的表达,纯化该融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠,ELISA法测定抗血清的效价可达1:2 000.抗血清与融合蛋白及拟南芥总蛋白的western-blot结果表明:制备的抗血清具有较高的活性和特异性. 王鸣刚 赵宏 刘左军 吴亦亮 陈亮关键词:原核表达 融合蛋白 抗血清 优良红锥种质资源遗传多样性的ISSR分析与聚类 被引量:8 2009年 利用ISSR分子标记对来自10个不同生态地区的红锥优良种质进行基因组遗传多样性分析.从20条引物中筛选出11条具有扩增多态性的引物用于ISSR-PCR扩增,共扩增出435条带,其中多态性条带325条,占总扩增条带的74.7%,平均每个引物扩增3.95条.ISSR标记分析揭示出红锥10个优良种质的遗传相似系数介于0.473 7-0.808 1之间,平均值为0.728 7.用STATIS统计软件的欧氏可变类平均法构建类型之间的分子系统树,聚类分析结果将10个优良红锥种质分为4个类群. 王鸣刚 赵宏 陈晓前 王蕾 陈亮关键词:红锥 ISSR 聚类分析 苜蓿遗传转化体系的优化与AtPCS1基因表达载体的构建 2007年 通过对6种不同基因型苜蓿愈伤组织的形成能力、愈伤组织的分化能力的比较发现,不同苜蓿品种间的分化率存在显著差异(P<0.05),其中甘农1号分化率最高(42.9%);对甘农1号叶片、下胚轴及子叶等外植体的分化再生能力研究发现,叶片起源的愈伤组织分化时间短,且丛生芽形成数量高于下胚轴和子叶;再生芽可在B5培养基上成苗,并在蔗糖浓度为10 g/L的1/2 MS培养基上顺利生根.据此认为,苜蓿甘农1号叶片是适于做遗传转化的理想材料.利用RT-PCR方法扩增拟南芥螯合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列构建了AtPCS1的植物表达载体pBI121-AtPCS1,为下一步AtPCS1基因转化苜蓿奠定了基础. 王鸣刚 赵宏 刘晓风 吴亦亮 陈亮关键词:苜蓿 遗传转化体系 植物表达载体 农杆菌介导AtPCS1基因转化苜蓿 被引量:7 2007年 利用RT-PCR扩增拟南芥螫合肽合成酶(AtPCS1)基因全序列.进一步构建AtPCS1的植物表达载体pB I 121-AtPCS1,转化农杆菌EHA105;然后用转化的农杆菌EHA105以叶盘法侵染苜蓿甘农一号叶片,在50mg/L Kan的筛选压下,经过约80~100d的筛选,获得57棵再生苗.随机取其中9棵再生苗进行PCR检测,其中6棵为阳性.初步鉴定表明AtPCS1基因已整合到苜蓿基因组中. 王鸣刚 任小换 李志忠 李雪雁 吴亦亮 陈亮关键词:植物表达载体 苜蓿 农杆菌介导的AtPCS1基因转化陇东苜蓿的初步研究 被引量:3 2010年 利用植物表达载体pBI121-AtPCS1转化农杆菌LBA4404,经菌落PCR鉴定获得阳性菌,利用叶盘法以重组的农杆菌侵染陇东苜蓿的子叶.采用GUS组织化学染色和对部分转基因再生植株进行PCR鉴定,初步结果表明AtPCS1基因已成功整合到苜蓿基因组. 王鸣刚 骆焕涛 李盼盼关键词:转基因植株 口蹄疫病毒抗原决定簇融合基因转化苜蓿 被引量:1 2011年 通过农杆菌的介导,以携带O型和A型口蹄疫抗原决定簇融合基因O21-O14-A21-HBcAg的植物表达载体转化苜蓿(Medicago sativa)愈伤组织,并再生得到抗性植株。试验建立了苜蓿甘农1号愈伤组织再生系统;优化了农杆菌介导的苜蓿遗传转化系统;获得抗性再生植株4棵;GUS报告基因在转化的愈伤组织中得到瞬时表达;抗性植株PCR检测结果证实目的基因已经成功整合到苜蓿基因组中。 王鸣刚 罗茂春 彭轶楠 卢真 陈亮关键词:苜蓿